Основа биовакцины - это материал опухолевого образования. Важно понимать, что использование вакцины на основе дендритных клеток является лишь частью комплексной терапии в лечении рака.
Дендритные клетки т.е. вакцину на их основе изготавливают после хирургического лечения с применением полученного в процессе вмешательства опухолевого материала, а также клеток, выделенных из крови больного.
После этого пациент продолжает основной курс терапии (химиотерапию или другое) и после его окончания несколько раз получает дендритную вакцину, при помощи которой удается закрепить полученный результат терапии. Это обеспечивает профилактику рецидива и развития метастазов.
До настоящего момента в мире было проведено более 1000 клинических испытаний биовакцин где применялись дендритные клетки. В этих испытаниях принимали участие больные с распространенными стадиями рака, и в результате был сделан вывод, что использование биовакцин должно быть направлено не только на борьбу с опухолью, но и на профилактику рецидивов и образования метастазов.
Роль дендритной вакцины в лечении рака сложно переоценить, ведь большинство летальных исходов при онкологических опухолях возникает в результате прогрессирования патологии и .
На сегодняшний день нами получены результаты клинических исследований, а изготовление дендритной вакцины проводится усовершенствованным методом, не имеющим аналогов во всем мире.
Роль дендритных клеток
Дендритные клетки являются важным звеном в формировании приобретенного иммунитета. Согласно данным медицинских исследований, количество дендритных клеток в организме пациента со злокачественными опухолями существенно снижено, а сами они функционируют неполноценно.
Считается, что снижение количества дендритных клеток и потеря эффективности их работы является одной из основных причин отсутствия полноценной иммунологической защиты организма на развивающийся раковый процесс.
Из этого можно сделать вывод, что даже при введении антигенов непосредственно в патологический очаг не наблюдается активизации иммунитета в нужном объеме. При культивировании дендритных клеток в условиях in vitro часто удается избежать отрицательного действия иммунносупрессивных факторов и обеспечить полноценное созревание этих клеток.
Дендритные клетки культивируют в среде, которая содержит материал опухоли. Для изготовления вакцины материал, взятый из опухоли, обрабатывается специальным образом, что позволяет повысить иммуногенность опухолевых антигенов.
Индивидуальное изготовление вакцины для каждого пациента
Биовакцины, изготовленные индивидуально для каждого отдельного пациента, на сегодняшний день являются самыми безопасными и высокоэффективными в лечении онкологических заболеваний. Благодаря проведенным исследованиям было установлено, что использование вакцин на основе дендритных клеток в составе комплексного лечения рака позволило существенно повысить продолжительность и качество жизни пациентов.
После введения вакцины в организм дендритные клетки перемещаются в лимфоидную ткань, где участвуют в обучении Т-лимфоцитов и инициируют их пролиферацию. Терапевтический эффект вакцины заключается в активизации цитотоксических Т-лимфоцитов, активность которых у онкологических больных существенно снижена.
Каждый пациент сталкивается с тем, что химиотерапия на 3 и 4 стадиях перестает уменьшать опухоль и метастазы.
Это показатель к тому, что пора переходить на более современные методы терапии рака. Для подбора эффективного метода лечения вы можете обратиться за
На консультации обсуждаются: - методы инновационной терапии;
- возможности участия в экспериментальной терапии;
- как получить квоту на бесплатное лечение в онкоцентр;
- организационные вопросы.
После консультации пациенту назначается день и время прибытия на лечение, отделение терапии, по возможности назначается лечащий доктор.
Медицинский Центр Cologne (MCC) был основан Робертом W.D Гортер, MD,
PhD, и был под его руководством в течение последних двенадцати лет.
Центр предназначен для лечения рака с использованием иммунной поддержки,
нетоксичной терапии рака, а также других хронических заболеваний, таких
как инфекции гепатита В и С и ВИЧ.
Доктор Гортер разработал эту
программу после более чем тридцати пяти лет медицинского опыта, сам
пережив рак, и после того, как был директором программы в области СПИДа,
лечения и исследования, в течение четырех лет. Доктор Гортер получил имя доктора медицины в Университете Амстердама,
медицинской школы в Нидерландах, где он окончил в качестве семейного
врача в 1973 году.
Он завершил свою вторую докторскую подготовку в Университете Калифорнии – Сан-Франциско (UCSF) медицинской школe в 1986 году. Доктор Гортер служил в качестве полноправного члена UCSF факультета с 1986 по 2008 год.
Доктор Гортер провел более двух десятилетий для создания и совершенствования эффективной методологии для иммунотерапии. Он является пионером в комплексном использовании лечебных лихорадок (повышение температуры, диапазон, общая гипертермия тела), и также активно сотрудничал с подходом на вакцинацию иммунной системы для восстановления скрытых иммунной функции.
Исследования показали, что новые и жизнеспособные дендритные клетки можно вводить в организм в виде вакцины. Если там существует рак, то прививка дендритными клетками обращает внимание иммунной системы на его присутствие и возобновляет работу соответствующих функций.
Это служит средством мобилизации особой силы иммунной системы, способной находить рак и бороться с ним. Эти дендритные клетки получают из лейкоцитов собственной крови пациентов (поэтому они являются «аутогенными»).
Первоочередная задача клеточного иммунитета заблаговременно обнаруживать и уничтожать клетки рака. Нужно понимать, что у каждого человека в организме каждый день образуются тысячи клеток рака. До тех пор, пока иммунная система будет способна распознавать их заранее, и контролировать вновь появляющиеся раковые клетки, человек никогда не заболеет клиническим раком, даже в течение всей жизни.
У пациентов с развитыми злокачественными болезнями, наблюдается общий иммунодефицит 1.
Когда появляется рак, иммунная система, по определению, ослаблена или
организм был подвержен интенсивному воздействию канцерогенов.
Ослабленные иммунные функции часто сопровождаются падением их числа
и/или способностью иммунных клеток эффективно распознавать или
уничтожать клетки рака.
Дендритные клетки – это одно из главных условий
эффективной реакции иммунитета на клетки рака. Дендритные клетки
циркулируют по тканям организма, проверяя их на наличие аномальных
клеток. Дендритные клетки также нацелены на потенциально злокачественные
клети из-за хронической инфекции вируса (например, хроническая вирусная
инфекция в шейке матки, такая как вирус бородавки человека, которая
может превратиться в злокачественную).
Когда аномальная клетка, например клетка рака, обнаружена, дендритные клетки направляются к ближайшему лимфатическому узлу и передают ему «идентификационный номер» раковой клетки, которую необходимо уничтожить. Если иммунная система больше не может распознавать клетки рака, она не способна уничтожать злокачественные клетки, по мере того, как они появляются изо дня в день. Когда это происходит, рак приобретает опору и беспрепятственно увеличивается.
Клетки опухоли, которые могут годами оставаться неопознанными, относятся к субклиническому раку. Через некоторое время, опухоль может начать развиваться, не будучи обнаруженной, и накапливаться.
За последние 10 лет, в Центре прошли терапию дендритными клетками около 4200 пациентов. В Медицинском Центре Кёльн были успешно вылечены такие состояния заболевания раком, как – первичная и вторичная опухоль головного мозга, первичный рак костей и метастазы в костях, рак груди, рак поджелудочной железы и толстой кишки, все виды метастазов печени, холангиоцеллюлярный рак, рак легких, меланома и рак предстательной железы.
Используя протокол «Модели Гортера» пациенты, находящиеся на конечной стадии рака, часто испытывают частичную ремиссию и стабильное состоянии в течение нескольких лет, так же как и хорошее качество жизни.
Некоторые даже переживают полную и продолжительную ремиссию. Например,
на сегодняшний день, 48% всех пациентов на IV стадии мультиформной
глиобластомы, достигли полной и длительной ремиссии. Примечательно то,
что статистические данные из медицинской литературы показывают, что при
стандартном лечении, около 71% всех пациентов с диагнозом IV стадии
мультиформной глиобластомы, умерли в первый год после диагноза и только
1% пациентов прожили три года.
Эти результаты отражают положительные
коэффициенты смертности, часто наблюдаемые у пациентов Медицинского
Центра Кёльн. Терапия дендритными клетками была центральным аспектом
лечения, проводимого док. Гортером, в течение последних 10 лет.
Эта работа явилась первооткрывателем в использовании умеренного подходы к применению гипертермии и иммунотерапии, сформировав безопасный, эффективный протокол лечения, который в данный момент ратифицирован в медицинской литературе, прошедшей экспертную оценку.
На сегодняшний
день, исследовательские центры по всему миру изучают лечение дендритными
клетками, которое продолжает становиться «потенциально
сильнодействующее, нетоксическое и широко применимый способ вакционного
лечения онкологических пациентов»2.
В мае 2010 года, Управление по
контролю за продуктами и лекарствами США признало вакцинации дендритными
клетками успешным методом лечения метастатического рака предстательной
желе
зы. Специалиста ожидают, что через несколько лет, вакцинация
дендритными клетками станет частью стандартной терапии различный (и
даже, может быть всех) видов рака
Протокол Гортера
“Я бы вылечил все болезни, если бы только смог
вызывать повышенную температуру”
” Парменид, Греческий врач и философ,
510 до н.э. ” Оказывается, повышенная температура – это недостающий элемент в
понимании проблемы рака. У большинства пациентов, внутренняя температура
тела ниже средней, и они не могут развить повышенную температуру.
Поэтому, они не способны активировать свою иммунную систему. Научно
доказано, что жар – это защитный механизм. Когда температура тела
достигает 38.5° C (101.3° F), иммунная система переходит в состояние
тревоги.
При такой температуре, уровень химических веществ в кровотоке
удваивается, и иммунная защита во всем организме усиливается. За шесть
часов, практически каждая основная защитная функция иммунной системы
начинает работать в два раза более продуктивно27.
У большинства
онкологических пациентов, которые никогда не испытывали лихорадку, этот
процесс находится в бездействии. Чтобы снова активировать работу
иммунной системы у этих пациентов, «Модель Гортера» использует метод
контролируемого повышения температуры, в научной литературе описанного
как «гипертермия всего тела на уровне лихорадки» – форма лечения, при
которой организм нагревается до умеренной температуры, приблизительно до
38.5° C (101.3° F).
1. Первый шаг в «Модели Гортера»
– увеличение температуры – либо путем
общей, либо частичной гипертермии, проводящейся вместе с вакцинациями
дендритными клетками. Обычно, специальные центры стволовой части мозга
отвечают за поднятие и контроль повышенной температуры, а также за
поддержание внутренней температуры тела.
То, что регуляторы температуры
организма расположены глубоко внутри ствола мозга, показывает, какое
большое значение имеет внутренняя температура тела, и как мозг связан с
поддержанием постоянной температуры (независимо от температуры внешней
окружающей среды).
Лихорадка – это необходимый компонент, который
запускает всю защитную систему иммунитета, которая очень важна для
уничтожения болезней
. Лихорадка также запускает процесс восстановления
тканей. Это четко зафиксировано в таких ситуациях, как несчастные случаи
или других происшествиях, причиняющих вред органам.
Как было описано выше, лихорадка вызывает иммунную реакцию при 38.5 °C (101.3 °F). Затем иммунная система переходит с режима «автопилота» в очень активную стадию работы, поразительно увеличивая свою силу в процессе подготовки к атаке всей системой любых анормальных клеток, которые будут обнаружены. Также призываются такие иммунные защиты широкой специализации, как клетки натуральные киллеры.
Вкратце, лихорадка подготавливает организм к полноценной реакции иммунной системы и восстанавливает ее механизмы.
2. Второй шаг в протоколе
– это вакцинация дендритными клетками, которая
дает защитным функциям иммунной системы средства для распознавания и
направленного уничтожения рака. Дендритные клетки – это белые кровяные
тельца, служащие «сыщики» и «ружьё с длинным стволом» иммунной системы
.
Они перемещаются в органах и тканях организма, ища «плохих парней» –
анормальные и злокачественные клетки, которые могут причинить вред
организму. Когда эти ненормальные клетки обнаружены, в дендритной клетки
начинает свою работу механизм полной идентификации.
Она направляется к ближайшему лимфатическому узлу. Это как «военная база», где сотни тысяч вооруженных и хорошо натренированных солдат, клеток натуральных киллеров, ждут, чтобы защищать организм. Дендритная клетка предоставляет ID или «специфический антиген» злокачественной клетки, что запускает работу клеток натуральных киллеров в миссии по устранению рака – «найти и уничтожить».
Как это происходит :
Сначала, после простого взятия пробы крови, ее отправляют в высокотехнологическую медицинскую лабораторию, где специально обученные микробиологи и технические специалисты выделяют из крови определенные белые кровяные тельца (моноциты). Затем, в течение семи дней, они выращивают и трансформируют эти клетки в новое поколение дендритных клеток. Это новое поколение жизнеспособных, активизированных дендритных клеток вводятся в организм пациенты путем простейшей внутрикожной инъекции.
" После того, как мне сделали операцию на легкие, чтобы удалить некоторые придаточные опухоли, мы принесли вещество из второго легкого в Кёльн, потому что в нем содержались активные клетки опухоли. Эту ткань использовали, чтобы создать дендритные клетки.">Когда я начал проходить лечение в Медицинском Центре Кёльн, док. Гортер оценил мое состояние и предложил двухнедельный курс вакцинации вирусом ньюкаслской болезни. Прежде чем началось лечение, у меня взяли образцы крови. Мне давали вакцину каждый день, оставляя один выходной. В первую неделю ее вводили внутривенно. После этого мне делали инъекции, а также давали ее в виде распыляемого раствора, который я вдыхал. Мы ездили в Кёльн каждый день и забирали вакцину для следующего дня домой, где мне помогала ее вводить медсестра в нашем городе.Дендритные клетки я получал раз в месяц. Первая вакцинация была через восемь дней после серии вакцинаций вирусом ньюкаслской болезни, также состоящей из восьми дней. Вирус едва ли давал какие-то побочные эффекты – я немного дрожал, и у меня была температура, но не так сильно, как при клеточной терапии, уже через пол - часа после которой, я должен был лечь в постель. Лечение помогало и через девять месяцев сканирование показало, что рак печени был в состоянии ремиссии, а опухоли в легких были стабильными.
Я прекрасно себя чувствовал физически.Доктора в Роттердаме были поражены и они посчитали, что я в достаточно хорошей форме, чтобы сделать операцию и удалить опухоли в легких. Они обнаружили, что раковые клетки в первой легком полностью умерли (некроз). Под рентгеновскими лучами было не заметно, что у меня когда-то была опухоль. Мы были так счастливы. Во втором легком все еще находились активные клетки опухоли, хотя большая часть опухоли также подверглась некрозу. Но края вокруг того места, где делали операцию были чистыми, а также чистыми были и лимфатические узлы – и в моем другом легком и в моей печени больше не было активных раковых клеток. Вим Куустербоер, пять лет назад пережил гепатит В и вирус гепатита В, сопровождавшийся первичным раком печени с метастазами в лимфе, печени и легких."
Вим Куустербоер, пять лет назад пережил гепатит В и вирус гепатита В, сопровождавшийся первичным раком печени с метастазами в лимфе, печени и легких .Иммунная система – это система защиты организма не только от вредоносных микроорганизмов (бактерии, простейшие, грибы и вирусы), но и от собственных вырождающихся клеток , которые бесконтрольно делятся.
Каждый день жизни в человеческом организме зарождается около 8 злокачественных опухолей ! И при этом средняя частота развития опухолевой болезни - 1 раз в 200 лет (клеточных делений)! Это отражает работу иммунной системы человека по распознанию и уничтожению измененных клеток организма, из которых в последствие может развиваться рак .
И все-таки иногда иммунная система не распознает такие клетки. В свою очередь, опухоль во время своего роста продуцирует вещества, угнетающие иммунную систему. Как следствие у большинства людей, страдающих раковой болезнью, иммунная система ослаблена . Это служит причиной назначения врачами комплексного медикаментозного лечения (витамины, микроэлементы и т.д.) для стимуляции иммунной системы .
В последнее время благодаря интенсивным исследованиям в области иммунологии открыты новые факторы и типы клеток , посредством которых реализуется иммунный ответ. Количество этих исследований постоянно растет, и сегодня мы понимаем иммунные процессы намного, чем 10 лет тому глубже назад. И совершенно ясно, что дендритные клетки в этих процессах играют особо важную роль.
Ученые подошли вплотную выращивать дендритные клетки осуществляющие патрулирование и обнаружение чужеродных структур в тканях организма. Дендритная клетка выступает посредником для других иммунных клеток, которые непосредственно выполняют функцию иммунной защиты– обнаруживают и уничтожают чужеродную клетку или возбудителя.
Эти структуры захватываются дендритными клетками, разлагаются на более мелкие, которые потом «выносятся на показ» на поверхность клетки. В таком виде дендритные клетки мигрируют из тканей в лимфоузлы. Там чужеродные структуры будут представлены клеткам-исполнителям (цитотоксическим Т-лимфоцитам), которые таким образом активируются, покидают лимфоузлы, выходят в ткани, атакуют и уничтожают структуры, обладающие представленным им признаком.
В дальнейшем дендритные клетки могут также активировать другие иммунные клетки – так называемые Т-хелперы . Активные Т-хелперы с током крови попадают на «место событий», и там вырабатывают вещества, поддерживающие активность клеток-исполнителей.
В результате взаимодействия дендритных клеток и Т- хелперов также стимулируются к росту и выработке специфических антител антителпродуцирующие В-клетки.
С помощью специальных методов из крови больного выделяются клетки-предшественники, из которых впоследствии выращивают дендритные клетки. В присутствие определенных веществ их высаживают на лабораторные чашки, чтобы клетки не утратили способности к дальнейшему развитию. Во время фазы созревания в культуру клеток добавляют структуры опухолевых клеток, полученные путем генной инженерии, либо «обломки» опухоли самого пациента. Незрелая клетка-предшественник способна захватывать эти структуры. Захваченный «обломок» претерпевает определенные структурные изменения, чтобы позднее характерный признак этой опухоли мог быть лучше распознан другими иммунными клетками.
В результате этих процессов клетка- предшественник превращается в дендритную клетку, которая на своей поверхности несет признак опухоли с особой сигнальной последовательностью. Именно эту последовательность и распознает иммунная клетка как чужеродную.
Теперь созревшие дендритные клетки вводятся под кожу, откуда они активно перемещаются в лимфоузлы , активируют различные типы клеток – исполнителей (цитотоксические Т-лимфоциты), которые при контакте с опухолевой клеткой уничтожают ее. Активные клетки-исполнители «ознакомлены» с чужеродным признаком, с током крови они распространяются по всему организму и «ищут» в разных тканях носителей именно этого признака.
При встрече со своей целью (в данном случае с опухолевой клеткой), клетка-исполнитель повреждает ее и вырабатывает вещества, оповещающие другие иммунные клетки.
Эффективность лечения
дендритными клетками
На сегодняшний день доказана эффективность лечения дендритными клетками больных раком кожи, почки, молочной железы, предстательной железы, а также раком толстой кишки и яичника.
Для большинства видов рака уже существуют стандарты лечения, которые создавались десятилетиями. Иммунотерапия (вакцинация дендритными клетками) сегодня рекомендуется как поддерживающая, в комплексе с химиотерапией и лучевой терапией. Известно, что иммунные клетки более эффективно борются с клетками опухоли, которая ранее уже подверглась разрушительному действию «химии или радиации».
Вакцинация дендритными клетками также часто применяется, когда рутинная терапия не приносит желаемого эффекта. Примером для этого может служить лечение рака почки и меланомы кожи.
Наибольший эффект при вакцинации проявляется на ранних стадиях болезни, когда в организме еще не так много раковых клеток. В этой ситуации иммунные клетки зачастую намного эффективнее чем у больных с большей опухолевой массой. Поэтому перед лечением дендритными клетками всегда показано специальное лабораторное исследование крови, позволяющее определить реактивность иммунной системы. Как при стандартном лечении рака, так и при лечении дендритными клетками, терапия будет тем эффективнее, чем раньше она начнется.
Дебреценские исследователи изучают свойства дендритных клеток, которые являются определенным типом клеток иммунной системы. С помощью перепрограммирования клеток открывается возможность эффективного лечения ряда заболеваний, в том числе злокачественных опухолей.
Так называемые дендритные клетки составляют лишь тысячную часть лейкоцитов, они получили свое название, из-за находящихся на них шипах: дендритах. Дендритные клетки, первыми встречают возбудителя, поражающего человеческий организм, и играют ключевую роль в запуске иммунного ответа. Они развиваются в красном костном мозгу, и оттуда распространяются по всем тканям, где осуществляется их патрулирование.
Множество клеток иммунной системы располагают антиген-представляющей способностью, но дендритные клетки, по сравнению с ними, выполняют эту функцию более эффективно. Поэтому, в последние годы на основе дендритных клеток разрабатываются противораковые вакцины.
При встрече с возбудителем или злокачественной раковой клеткой, дендритные клетки атакуют вторженцев и, выявив чужеродные молекулы (антигены) на вторженцах, детально обрабатывают и передают их другим иммунным клеткам, клеткам-т адаптивной иммунной системы, запуская этим следующие защитные процессы.
Благодаря успехам в исследовании дендритных клеток, в 2011 году в области медицины и физиологии была присуждена нобелевская премия. Премия была присуждена со временем скончавшемуся профессору из Канады, Ральфу Штейнману, который тесно сотрудничал с медико- научным центром здоровья Дебреценского Университета DE OEC, где его научные открытия обширно используются. Ведутся фундаментальные исследования для лучшего познания биологии дендритных клеток в институте иммунологии, а также биохимии и молекулярной биологии DE OEC во главе с др. Евой Райнавельди и др. Ласло Надь.
В клиническом центре клеточной терапии, действующем на базе университета, применяются методы лечения у больных с опухолями с целью пробуждения противоопухолевого иммунного ответа, разработанные профессором Штейнманом.
Ласло Надь, заведующий Центром Генетики и его коллеги исследуют белки, регулирующие транскрипцию генов. В центре первоначального исследования такие белки, которые под влиянием жиров могут запустить и остановить гены. Учёные изучали тот фактор, каким образом влияет так называемая транскрипция на функционирование дендритных клеток.
Согласно исследованиям в генетике, широко используемым методом mikroarray (чип нуклеиновой кислоты) учёными были выявлены те белки, кодируемые РНК, которые входят в состав дендритных клеток. Оказалось, что уровень одного из белков значительно возрастает в процессе созревания (дифференциации). Пришли к выводу, что этот белок может обладать какой-то функцией, поэтому исследователи изучили те гены, которые запускает или останавливает этот белок. Таким образом, получили новую информацию о маршруте, который контролирует этот белок. В результате исследований др. Надь и его коллеги обнаружили специфический маршрут, по которому осуществляется приём, обработка и представление липидов в иммунной системе.
Затем учёные систематически тестировали и другие составные семейства жирорастворимых соединений (ретиноевая кислота, витамин а, витамин d); изучали маршруты, которые эти вещества регулируют, и какова их связь с другими иммунными функциями. По словам др. Ласло Надь, до сих пор исследования о маршрутах проводились на дендритных клетках из человеческих моноцитов (группа лейкоцитов) in vitro (т.е. в лабораторных условиях). В настоящее время исследования идут по направлению in vivo, то есть, на живом организме (на мышах). На мышах можно моделировать и исследовать различные заболевания, например автоиммунные заболевания, воспаления и такие патологические изменения, которые связаны с человеческими заболеваниями.
В дальнейшем др. Надь заметил, что исследования имеют значение в том, что эти клетки можно использовать в так называемых противоопухолевых вакцинациях. Можно развести такие клеточные культуры, в которых опухолевые клетки, изъятые с человека, вскармливают дендритными клетками. впоследствии эти клетки, возвращаясь в организм, могут вызвать сильный иммунный ответ против опухолевых клеток.
«Наши исследования проводятся с целью, чтобы с небольшими жирорастворимыми молекулами – как например рецепторы эстрогенов или витамин d – повлиять на процесс транскрипции генов, то есть на регуляторные факторы генов, и таким образом может осуществляться перепрограммирование клеток. Мы сами можем преобразовывать иммунофенотипы, то есть иммунные свойства»– говорит др. Надь. Эти перепрограммированные клетки можно впоследствии потом применить в области опухолевой вакцинации.
Значение перепрограммирования клеток заключается в том, что они более эффективно могут реагировать на отдельные виды опухолей, или же можно создать «индивидуальные» дендритные клетки для различных типов опухолей.
Для выделения предшественников дендритных клеток у пациента берут 150 мл крови. Чтобы кровь не сворачивалась, в нее добавляют противосвертывающее средство – Гепарин. Эту кровь в охлажденном виде немедленно доставляют в нашу лабораторию для последующей обработки.
В специальных сосудах кровь центрифугируется и разделяется на фракции. Целью фракционирования является отделение белых кровяных клеток от красных кровяных клеток и клеток неспецифического иммунного ответа – гранулоцитов.
Фракция красных кровяных клеток и гранулоцитов осаждается на дно пробирки и в дальнейшем не используется. Во фракции лимфоцитов находятся те клетки, из которых в последствие могут развиться дендритные клетки.
После нескольких ступеней помещаются в специальные чашки с питательным раствором. Здесь клетки, в том числе и клетки-предшественники, постепенно оседают на дно пластиковой чашки и фиксируются там. И после завершающей фазы очистки в питательный раствор добавляются факторы роста.
Затем клетки помещаются в специальный инкубационный шкаф, в котором поддерживается постоянная температура, а также обеспечиваются и контролируются необходимые условия среды для роста и созревания культуры клеток. Здесь проходит фаза роста.
Для запуска процесса созревания в культуру клеток необходимо добавить белковые субстанции, которые находились на поверхности опухолевых клеток этого пациента. Опухолевые клетки предоставляет патолог. Клетки берутся из хирургически удаленной опухоли или из материала биопсии. Этой белковой субстанцией может также выступать и т.н. опухолевый маркер, который ранее определялся в крови пациента в повышенной концентрации.
В общей сложности В общей сложности дендритные клетки выращиваются в условиях инкубационного шкафа 7 дней. Зрелость дендритных клеток можно определить методом микроскопии – форма у всех клеток разная, неправильная. Обращают на себя внимание множественные тонкие волосоподобные выросты, окаймляющие клетку.
Перед тем, как «собирать урожай» клетки проходят еще один тест на зрелость в так называемом проточном цитометре. В нем определяется наличие специфических структур, их количество и взаимоотношение на поверхности дендритных клеток.
После проверки зрелости, культура дендритных клеток собирается и снова подвергается многократной тщательной очистке. Потом половина клеток собирается для первой инъекции в маленький шприц, который передается лечащему врачу. Врач вводит вакцину пациенту в подкожную клетчатку живота в область паховых лимфоузлов и, через 15 минут пациент может покинуть клинику.
Вторая часть клеток собирается для последующей инъекции и хранится в специальном растворе при температуре -196°С. Эти клетки будут разморожены непосредственно перед второй инъекцией и, подобно первой, набраны в шприц и переданы лечащему врачу.
Когда проводится вторая инъекция?
После первой инъекции необходимо регулярно проходить исследования крови, чтобы следить за реакцией иммунной системы. Концентрация иммунных клеток, уничтожающих опухоль значительно повышается. Снижение этой концентрации является показанием для второй инъекции.
Какие побочные явления могут
возникать в процессе лечения?
При лечении дендритными клетками могут наблюдаться определенные побочные эффекты. Они могут возникать как следствие общего иммунного ответа организма, что приведет к высвобождению веществ, участвующих в инфекционных воспалительных реакциях. Субъективно это может проявиться умеренным повышением температуры тела и слабостью. Реакция на инъекцию может также выражаться увеличением лимфоузлов. Иногда наблюдается покраснение кожи на месте инъекции.
Терапия дендритными клетками –
это гуманное лечение
В отличие от химио- или радиотерапии, когда организм подвергается воздействию чужеродных веществ или облучения, при лечении дендритными клетками с опухолью борется собственная иммунная система организма. В сравнении с другими видами лечения, терапия дендритными клетками очень редко сопровождается побочными реакциями, которые слабо выражены и обладают кратковременным характером, что едва ли отражается на общем самочувствии и работоспособности пациента. Кроме того, эта терапия проводится амбулаторная и не требует пребывания в клинике.
Таким образом, терапия дендритными клетками может проводиться в дополнение рутинного лечения (химиотерапии), которое угнетает иммунную систему. И по этой причине должно быть разделено с последним во времени. Результаты последних обширных исследований свидетельствуют об эффективности данного метода, что дает возможность поставить его в один ряд с общепризнанными методами. Однако, не смотря на это, терапия дендритными клетками по-прежнему рассматривается как дополнение к уже существующим методам.
Заключение
Лечение дендритными клетками является молодым видом лечения. Однако, несмотря на это, уже достаточно широко известно в научных кругах благодаря своей эффективности в лечении рака. Некоторые немецкие страховые компании и больничные кассы уже покрывают расходы на это лечение как на необходимую поддерживающую терапию при раке.
Одной из важных проблем современной инфектологии является хроническая рецидивирующая форма герпетической инфекции, вызванной вирусом простого герпеса 1 и 2 типов. От частоты рецидивов напрямую зависит и такая характеристика как качество жизни пациента. Вместе с тем частота рецидивов 6 и более раз в год при всей, казалось бы «безобидности» инфекции оказывает существенное влияние и на общее здоровье пациента. По данным Европейского регионального отделения ВОЗ герпетическая инфекция определена в группу заболеваний, определяющих будущее инфекционной патологии в текущем столетии.
Как известно, проявления хронической герпетической инфекции являются достаточно специфическими и проявляются единичными или сгруппированными пузырьковыми элементами с серозным содержимым внутри (везикул), которые появляются на фоне «продромы» - зуда и неприятных ощущений на месте будущих пузырьков. Сыпь имеет свое динамическое развитие: образование в динамике на месте пузырьков корочек и последующей гиперпигментации. От частоты обострений хронической инфекции зависит и форма болезни, и качество жизни пациента. На одно обострение в среднем уходит 1-2 недели выздоровления, соответственно трудоспособность в данный период несколько ограничена. Часто рецидивирующая форма инфекции фиксируется при частоте обострений не менее 4х-6ти раз за год, даже если периоды ремиссии длятся около 2,5 месяцев. При выраженном ослаблении иммунитета некоторые пациенты жалуются на частоту обострений до 15-20 раз в год. Безусловно, таким пациентам должна подбираться индивидуальная и длительная схема терапии с применением новейших методов.
Проявления простого герпеса
Разработанные схемы терапии герпетической инфекции включают противовирусную (ацикловир, валацикловир, фамцикловир и другие) и иммуномодулирующую (интерфероны, индукторы эндогенного интерферона, иммунопрепараты других групп) терапию, что достаточно эффективно на определенном этапе течения заболевания. Большинство схем терапии направлены на стихание самого обострения болезни, но не направлены на долгосрочный эффект. Такой терапии не всегда оказывается достаточно для достижения желаемого результата – сокращения рецидивов до минимума. Определенной проблемой является и развитие резистентности (устойчивости) вирусов к противовирусным препаратам, особенно применяемым бесконтрольно и без назначения врача. В связи с этим научные разработки пошли дальше. Разработаны препараты и схемы вакцинотерапии хронической герпетической инфекции. Но и у этих методов оказалась недостаточная максимальная активность. Дошла очередь до новейших научных основе лечения с помощью специфических дентритных клеток.
Дендритные клетки (дендроциты или ДК) относятся к клеткам иммунной системы и представляют собой особую разновидность лейкоцитов, имеющие ветвистую структуру (dendron–дерево, греч.). Дендритные клетки имеют довольно крупный размер – до 15-20 мкм и располагаются практически во всех органах и тканях. Дендритные клетки выполняют важную роль в иммунной системе – функцию представления антигена. Иными словами, при попадании микроорганизма (вирусы, бактерии, грибы и прочие) в наш организм Дендритные клетки его поглощают при помощи процесса фагоцитоза, а затем используют его антигены для «представления» специфическим иммунокомпетентным клеткам для выработки антител (антиген-специфический иммунный ответ). Дендритные клетки способны активировать с высокой силой такие иммунокомпетентные клетки, как CD4 иCD8 Т-лимфоциты. Вместе с тем многие научные исследования показали существенное снижение содержания дендритных клеток у пациентов с хроническими болезнями вирусной природы, что рассматривается в виде одной из причин формирования длительной персистенции вирусов в организме человека.
Один из современных методов лечения хронической рецидивирующей формы герпетической инфекции основан именно на презентации дендритными клетками антигена вируса герпеса в присутствии интерферона-альфа и других компонентов [«Способ иммунотерапии хронической часто рецидивирующей герпес-вирусной инфекции» патент RU 2485962 на базе ФГБУ "Научно-исследовательский институт клинической иммунологии "Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИКИ" СО РАМН)Останин А. А., Старостина Н. М., Черных Е.Р.].
Целью данного метода является создание дендритно-клеточных вакцин нового поколения, способных решить одну простую задачу – снижение клинических проявлений герпетической инфекции и сокращение частоты рецидивов до минимума с помощью экономически выгодного способа иммунотерапии хронической рецидивирующей герпетической инфекции. Достижение поставленной задачи достигается путем генерации из моноцитов периферической крови пациента аутологичных интерферон-альфа индуцированных дендритных клеток, нагруженных рекомбинантным антигеном вируса простого герпеса в культуре invitro, которые больной получает 2мя курсами в сочетании с препаратом рекомбинантного интерлейкина-2 в качестве адъюванта (препарата, усиливающего иммунный ответ). Именно за счет интерлейкина-2 идет активация Т-клеток, предупреждаются процессы апоптоза (клеточной гибели) лимфоцитов, синтеза долго живущих цитотоксических Т-лимфоцитов.
Ожидаемым результатом терапии является выработка цельного антиген-специфического иммунного ответа высокого уровня на длительный период времени.
Показания к лечению
Показанием для ДК-вакцинации является хроническая герпетическая инфекция, часто рецидивирующая форма при частоте рецидивов более 6 раз в год, причем с момента последнего рецидива должно пройти не менее 2х недель (то есть в период ремиссии).
Как проводится лечение дендритными клетками
Техническое выполнение метода состоит в следующем: пациент госпитализируется в стационар, где проводится генерация дендроклеток из периферической крови больного. В утренние часы отбирается 200 мл крови во флакон с гепарином (1000 Ед), к которой добавляется раствор желатиноля (40 мл) и проводится инкубация при 370 в течение 45 минут. Образуется лейкоцитарная взвесь, которую центрифугируют в течение 20 минут при 1000 об/мин. Осажденные клетки омывают фосфат-забуферным физиологическим раствором (PBS), наслаивают на градиент плотности фиккола-верографина и опять же центрифугируют 20 минут, но уже при 3000 об/мин. Собранные мононуклеарные клетки (МНК) подвергаются дополнительной обработке (дважды омываются, ресуспендируются) до выделения МНК в концентрации 3*106/мл, которые инкубируют при 370 в течение 2х часов (это незрелыедендроклетки). В последующем клетки проходят вновь дополнительную обработку, нагрузку интерфероном-альфа 1000 Ед/мл (Роферон-А, Roche, Швецария), повторную культивацию в течение 3х часов. Затем в присутствии препарата полиоксидоний (НПО ПетроваксФарм, Россия) в дозе 2 нг/мл и происходит окончательное созревание дентритных клеток.
Генерация ДК-клеток
Таким способом и получаются ИФН-ДК (интерферон индуцированные дендритные клетки), которые в последующем нагружают самим специфическим рекомбинантным (искусственно созданным в лабораторных условиях)антигеном вируса простого герпеса (HSV 1 gD, НПО «Диагностические системы» Нижний Новгород) в дозировке 5 мкг/мл при инкубации в течение 1 часа при 370.
Полученный препарат (специфические ИФН-ДК) в концентрации 6,0 * 106/мл криоконсервируют для последующего использования. Весь процесс изготовления длится 4 суток.
Методика ДК-вакцинации
Методика ДК-вакцинации с применением данного препарата состоит их 2х курсов вакцинотерапии:
1) «Индукторный курс» включает 4-6 подкожных инъекций в верхнюю треть плеча в дозе 5,0*106/мл с интервалами в 2 недели. Вакцинации проводятся на фоне одновременного введения интерлейкина-2 – препарата «Ронколейкин®» (ООО «Биотех», Санкт-Петербург) в дозе 0,25 мг, который вводится подкожно в качестве адъюванта.
Инъекции
2) «Поддерживающий курс» состоит из 3-6 подкожных инъекций ИФН-ДК в дозе 5*106\мл с периодичностью 1 раз в месяц также одновременно с адъювантом.
Контроль эффективности ДК-вакцинации проводят путем определения уровня пролиферативного ответа МНК на стимуляцию вакцинальным антигеном вируса герпеса (HSV 1gD) и митогеном (конканавалином А). У пациента забирается 10 мл венозной крови, которая подвергается обработке и в течение 72 часов оценивается уровень пролиферации и другие составляющие исследования. Результат предоставляется в виде среднего счета (имп/мин) их трех идентичных культур. Контроль проводится 4 раза: до лечения, после 1 курса, после 2 курса и через 6 месяцев после окончания терапии (последнее исследование через 15 месяцев после начала лечения).
Пргноз лечения
Использование данного метода ДК-вакцинации с применением ИФН-ДК вакцин выявил 75%ную эффективность у пациентов с часто рецидивирующей формой герпетической инфекции. Так, частота рецидивов у пациентов снижалась в 3 раза, причем сокращалась и общая площадь поражений при обострении, длительность ремиссии (межрецидивных периодов) удлиннялась до 3х и более месяцев. Также отмечалось улучшение показателей специфического антиген-индуцированного иммунного ответа как после второго курса вакцинации, так и через 6 месяцев после окончания лечения.
Таким образом, можно говорить о появлении нового эффективного метода ДК-вакцинации, способного стимулировать выработку антиген-специфического иммунного ответа не только в период вакцинотерапии, но и через 6 месяцев после завершения лечения, что безусловно повлияет на частоту рецидивов при данной болезни и качество жизни пациентов с хронической часто рецидивирующей герпетической инфекцией.
Врач инфекционист Быкова Н.И.