Применяют кожные тесты для выявления аллергических заболеваний, опосредованных реакциями гиперчувствительности I и IV типов. Техника выполнения кожных тестов описана в методическом письме А.Д.Адо и сотр. («Применение аллергенов неинфекионного происхождения для специфической диагностики и десенсибилизации больных аллергическими заболеваниями», М., МЗ СССР, 1969). Для кожных тестов используются стандартные аллергены, содержащие 10000 единиц белкового азота (PNU) в 1 мл. Как правило, кожные пробы ставят на внутренней поверхности предплечья. Одновременно ставят пробы с контрольной жидкостью и гистамином. При заболеваниях кожи тесты выполняют на участках, не затронутых повреждением. В настоящее время используются следующие кожные пробы: капельная, аппликационная, прик-тест, скарификационная, внутрикожная.
Капельная проба
На предварительно обезжиренную 70% спиртом кожу наносят каплю стандартного аллергена. Реакцию оценивают через 20 минут. Оценка пробы приведена в таблице 15-1.
Оценка капельной пробы
Аппликационная проба
На предварительно обработанную 70% спиртом кожу накладывают кусок марли (1 см3), смоченный раствором аллергена, и фиксируют лейкопластырем. Реакцию учитывают через 30, 60 мин, 6ч, 12ч, 24ч, 48ч, 72ч. Оценка аппликационной пробы приведена в таблице 15-2.
Оценка аппликационной пробы
Прик-тест
Прик-тест выполняется специальным prick-ланцетом. Используемое устройство позволяет стандартизовать глубину укола (1,0-1,5 мм). Укол выполняется через каплю аллергена и контрольную жидкость. Результат прик-теста учитывают через 15-20 минут. Оценка прик-теста приведена в таблице 15-3.
Оценка прик-тестов.
Скарификационная проба
На предплечье, обработанное 70% спиртом, наносят по капле 0,01% гистамина, контрольной жидкости и аллергенов (одновременно 6-10 аллергенов) на расстоянии 4-5 см друг от друга. Скарификатором через каждые капли наносят две параллельные царапины длиной 4-5 мм и расстоянием между ними 2 мм. Царапины делают поверхностными, не повреждая сосудов кожи. Через 10 минут после скарификации кожи капли промокают ватными тампонами. Пробы учитывают через 10-20 минут. Оценка скарификационных проб приведена в таблице 15-4.
Оценка скарификационных проб.
Следует помнить, что скарификационные пробы часто дают ложноположительные реакции.
Внутрикожные пробы
Выполняют, как правило, с микробными аллергенами. С неинфекционными аллергенами проводят только в случаях, когда аппликационные и скарификационные тесты дают отрицательный результат, а анамнез ясно свидетельствует об аллергии.
Техника выполнения пробы заключается в следующем: после обработки кожи предплечья или спины 70о спиртом инсулиновым шприцом внутрикожно вводят 0,02-0,1 мл аллергена. Вводимый внутрикожно аллерген должен быть в 10 раз меньшей концентрации, чем при скарификационном тестировании. В качестве контроля вводят внутрикожно контрольную жидкость и скарификационно раствор гистамина. Результаты пробы учитывают через 20 мин, 6ч, 12ч, 24ч, 48ч в соответствии со шкалой оценки, так как реакции на инфекционные аллергены могут протекать как по немедленному, так и замедленному типу.
Следует помнить, что внутрикожные пробы менее специфичны, чем накожные тесты и довольно часто дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Пр внутрикожном тестировании одновременное количество исследуемых аллергенов не должно превышать 4-5.
Оценка внутрикожных тестов
Результат реакции | Реакция кожи |
|
| через 20 мин | через 24-72 ч | |
| Отрицательный | Как в контроле | Как в контроле |
| Сомнительный | Гиперемия | Слабая гиперемия без инфильтрации ткани |
| Слабо положительный | Папула 4-8 мм, окруженная гиперемией | Гиперемия, инфильтрат диаметром 5-10 мм |
| Положительный | Папула 9-15 мм, окруженная гиперемией | Гиперемия, инфильтрат диаметром 11-15 мм |
| Резко положительный | Папула 16-20 мм, окруженная гиперемией с псевдоподиями | Гиперемия, инфильтрат диаметром 16-20 мм |
| Очень резко положительный | Папула более 20 мм, окруженная гиперемией с псевдоподиями, везикулы | Яркая гиперемия, инфильтрат диаметром более 20 мм, везикулы, лимфангоит |
Описание:
Аллергические диагностические пробы - высокоспецифичный и чувствительный метод диагностики аллергических и инфекционных заболеваний, в патогенезе которых преобладает аллергический компонент. Пробы основаны на местной или общей реакции сенсибилизированного организма в ответ на введение специфического аллергена.
Назначение аллергологических кожных проб:
Особое значение аллергические диагностические пробы имеют при диагностике аллергических заболеваний, так как определение аллергена или группы аллергенов, вызвавших состояние гиперчувствительности, позволяет в дальнейшем применять эти аллергены для гипосенсибилизации организма - наиболее специфического и перспективного метода лечения аллергических заболеваний.
При диагностике аллергических заболеваний в процессе сбора анамнеза выделяют предполагаемую группу аллергенов, которые могли вызвать у больного состояние гиперчувствительности. С этими аллергенами проводят аллергические диагностические пробы вне фазы обострения болезни. Параллельно с введением аллергенов вводят контрольные растворы - растворитель аллергенов и физиологический раствор.
Классификация аллергологических кожных проб:
I. Кожные пробы:
1) качественные:
- прямые
- внутрикожная
- скарификационная
- укол
- аппликационная
- капельная
- непрямая (реакция Прауснитца-Кюстнера)
2) количественные (аллергометрическое титрование)
II. Провокационные пробы:
- конъюнктивальная
- назальная
- ингаляционная
- холодовая
- тепловая
- экспозиционная
- элиминационная
- лейкоцитопеническая
- тромбоцитопеническая.
Кожные пробы на аллергены – это диагностический метод выявления индивидуальной чувствительности организма вследствие введения определенных веществ и последующего анализа воспалительной реакции (появление отека, изменение цвета, болезненность). Показанием для постановки кожных проб являются данные аллергологического анамнеза, показывающие роль одного или группы аллергенов в возникновении заболевания.
Противопоказаниями к проведению кожных проб являются:
Период резкого обострения основного заболевания;
Проявление у больного или астматических симптомов;
Острые инфекции (ангина,ОРВИ, грипп);
Заболевания сердечно-сосудистой системы;
Заболевания крови;
Туберкулезный процесс;
Беременность;
Заболевания печени и почек;
Острая стадия ревматизма;
Длительная терапия гормонами;
Прием антигистаминных препаратов (зиртек, кларитин, интал).
Скарификационные кожные пробы
Место постановки скарификационных кожных проб - поверхность предплечья по средней линии — (можно ставить пробы на коже спины). Одновременно можно поставить 10-15 кожных проб с различными аллергенами. Однако во избежание осложнений, особенно при повышенной чувствительности, рекомендуется одновременно ставить скарификационные пробы только с 2-3 видами аллергенов (особенно у детей).
Методика проведения
Кожу протирают 70-процентным спиртом и дают ей подсохнуть. В нижней трети предплечья, отступив на 4-6 см от лучезапястного сустава, наносят каплю свежеприготовленного раствора гистамина (максимальный срок хранения гистамина -6 часов). Положительная реакция с гистамином свидетельствует о достаточной реактивности кожи. Выше на предплечье наносят каплю тест-контрольной жидкости (контроль отрицательной реакции). Далее по средней линии на расстоянии 5 см друг от друга наносят капли испытуемых аллергенов. Специальными скарификаторами, отдельными для каждого аллергена, наносят две царапины длиной до 6 мм через нанесенные капли гистамина, тест-контрольной жидкости и капли аллергенов так, чтобы не повредить кровеносных сосудов кожи. У детей проводится одна царапина. Через 15 минут в месте царапины капли промокают стерильными тампонами, отдельными для каждой капли.
Прик-тест
Более пригодным для исследования, чем скарификационный, в настоящее время считается тест уколом прик- тест. При этом тесте поверхностное повреждение эпителия делается тонкой, неполной иглой, кожа слегка приподнимается кончиком иглы. При появлении кровотечения тест не оценивается. У больных , вызванным высокой чувствительностью к определённым видам растений, проводят кожные пробы в виде аппликации с экстрактами этих растений.
Аппликационные кожные пробы
Аппликационные кожные пробы проводят на неповрежденных участках кожи. Смачивают кусочек бинта размером 1 см2 и прикладывают его на кожу, сверху закрывают полиэтиленом и закрепляют. Результаты анализируют через 15-20 минут, 5 часов, двое суток.
Внутрикожные пробы
В случае отрицательных результатов скарификационных проб и положительных данных аллергологического анамнеза целесообразно провести внутрикожные аллергические пробы с тем же аллергеном. Вначале в нижнюю треть поверхности предплечья на расстоянии 5 см от лучезапястного сустава вводят тест-контрольную жидкость, затем отдельными стерильными шприцами вводят 0,02 мл каждого аллергена на расстоянии 5 см друг от друга. Реакцию читают через 20 мин - реакция немедленного типа. У очень незначительного числа больных при пыльцевой аллергии могут наблюдаться замедленные реакции (через 6, 24, 48 ч).
Осложнения
При резко положительных пробах иногда наблюдается общая реакция в виде обострения основного заболевания (ринита, конъюнктивита, бронхоспазма). У больных с резко выраженной чувствительностью к определённому аллергену в очень редких случаях может возникнуть , поэтому в кабинете должен быть набор медикаментов, необходимых для оказания срочной помощи.
Ложноположительные результаты
Специфичность скарификационных и внутрикожных проб не является абсолютной. Наиболее частые причины ложноположительных результатов кожных проб - повышенная чувствительность капилляров кожи к механическому воздействию или фенолу,который является консервантом в растворах аллергенов. В таких случаях и тест-контрольная жидкость дает положительную реакцию. Во избежание этого инструменты должны быть обработаны согласно инструкциии во избежание загрязнения аллергенами, остав¬шимися от прошлого тестирования. Устранив причины ложноположительных кожных проб, легче избежать ошибок в диагностике аллергенов.
Ложноотрицательные результаты
Иногда наблюдается отрицательный результат кожной пробы на гистамин. Это объясняется слабой чувствительностью кожных покровов (сниженная реактивность кожи): такую реакцию расценивают как ложноотрицательную. Во избежание ложноотрицательных результатов за 3 дня до проведения специфической диагностики рекомендуется отменить антигистаминные препараты, адреналин, гормоны. Чувствительность кожных проб возрастает в таком порядке: скарификационная, проба уколом, внутрикожная. При ложноотрицательных кожных пробах для получения достоверных результатов тестирование повторяют трижды с интервалом в 3 дня. У некоторых больных могут отсутствовать антитела, фиксированные в кожу; у таких больных кожные реакции на эти аллергены будут отрицательными, и для также необходимо провести другие тесты (провокационные тесты, вспомогательные тесты).
Кожные пробы - являются наиболее простым и безопасным методом диагностики пищевой аллергии, позволяющим выявить не только причинно-значимые аллергены, но и предположить тот или иной тип аллергической реакции, с которым связано обострение болезни.
Доступность кожных тестов обусловлена не только простой и недорогой техникой постановки, но и сравнительно небольшим списком противопоказаний для их проведения. Мнение о ценности и безопасности кожных тестов в литературе широко дискутируется. В связи с этим, ассоциация детских аллергологов и иммунологов России опубликовали основные положения о кожных тестах, которыми аллергологи и
практические педиатры руководствуются в работе:
1. Проведение кожного тестирования является одной из основных задач врача аллерголога.
2. Кожные тесты проводятся детям любого возраста.
3. Кожные тесты можно проводить практически со всеми аллергенами, выпускаемыми медицинской промышленностью.
4. Кожные тесты не проводятся в период обострения заболевания
(неполная ремиссия атопического дерматита не является
противопоказанием).
5. За 7 дней до проведения кожного тестирования исключается прием
антигистаминных препаратов, за 2 недели - прием
глюкокортикоидов местного действия на область кожи, где предполагается проведение тестирования.
6. Противопоказанием для кожного тестирования с определенными аллергенами является наличие в анамнезе анафилактических реакций к данным или перекрестнореагирующим аллергенам.
Особенно часто возникает вопрос, с какого возраста можно
проводить кожные пробы? Для проведения кожного тестирования ограничений в возрасте не существует. Однако необходимо учитывать, что реактивность кожи у детей до двух лет снижена, поэтому чувствительность проб у них ниже, чем у взрослых .
В зависимости от техники введения аллергена различают прик- тесты, скарификационные, внутрикожные и аппликационные (Ра1сЬ-Те81) кожные тесты. В России для диагностики аллергии до сих пор широко используются скарификационные пробы, хотя эксперты Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии не рекомендуют их использовать ввиду частых ложноположительных реакций и низкой информативности. В настоящее время основной рекомендуемый метод кожного тестирования - прик-тест. Методика прик-тестов стандартизирована, что облегчает сравнение результатов между собой, даже если они были получены в разных клиниках. Этот метод аллергодиагностики имеет ряд преимуществ перед скарификационными кожными пробами:
> менее травматичен;
> при его проведении в организм поступает минимальное количество аллергенов, в силу чего больному проводится большее число проб;
> значительно реже возникают ложноположительные реакции;
> низкая вероятность системных реакций.
По данным наших исследований информативность прик-тестов значительно превышает информативность скарификационных проб (ри.24).
Учитывая то, что в нашей стране кожное тестирование методом прик-теста широко не распространено, остановимся подробнее на данной методике. Прик-тест проводится на внутренней поверхности предплечья или верхней части спины. На предварительно обработанную кожу 70% раствором спирта наносят каплю тест-контрольной жидкости, раствора гистамина (отрицательный и положительный контроль) и экстракты аллергенов на расстоянии 2-2,5 см друг от друга, не менее 5 мм от запястья и 3 см от кубитальной ямки. Отдельными скарификаторами или прик-ланцетами через каплю наносят под углом неглубокие уколы (без
повреждения кровеносных сосудов кожи) на глубину не более 1-1,5мм. Реакция оценивается через 10-15 минут (при адекватной реакции на контроль). Ответ на травматизацию кожи не более 2 мм, поэтому доказательством сенсибилизации является размер папулы более 2 мм и/или гиперемия более 3 мм. Интерпретация результата прик-тест приведена в таблице 7. Установлено, что увеличение площади реакции при прик-тесте имеет явную корреляцию с вероятностью появления клиники пищевой аллергии.
По времени появления реакции можно предположить тот или иной тип иммунопатологической основы запуска аллергической реакции. 1дЕ- опосредуемые реакции проявляются немедленным (через 10-30 минут) кожным ответом, иммунокомплексные реакции проявляются спустя 6-12 часов, замедленные - через 24-48 часов.
В последнее время, все чаще указывается на «новую» методику в исследовании замедленного типа пищевой аллергии - аппликационные тесты с пищевыми продуктами (Л1ору-Ра1сЬ-те81).
По технике выполняются как аппликационные тесты, но с нативными продуктами, такими как, пшеница, молоко, яйцо, соя. Ра!сЬ-тест рекомендуется включать в программу обследования детей с атопическим дерматитом, эзофагитом и энтероколитом. В работе Е. 1§о1аип (1995) показано, что ра!сЬ-тест отрицательный, если аллергическая реакция развивается в течение первых двух часов после провокации, и положительный - при отсроченных реакциях . В исследовании С. КоеЬга (2001) отмечено, что при положительном ра!сЬ-тесте и положительных титрах 1дЕ антител корреляция с провокационной пробой близка к 100% . Поэтому метод считается очень перспективным, однако, на данный момент методика данных проб до сих пор не стандартизирована, поэтому исследования в этом направлении требуют своего продолжения.
Внутрикожные тесты применяют, главным образом, для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального и грибкового происхождения. С пищевыми аллергенами их проводят только в том случае, когда кожные тесты отрицательные или сомнительные, а анамнез четко положительный. Однако необходимо учитывать, что при данном тестировании увеличивается риск развития осложнений.
Не существует единого мнения о диагностической значимости кожных проб, особенно в зависимости от пищевого аллергена или клинической формы пищевой аллергии. Обследование больных пищевой аллергией показало, что процент положительных кожных проб к пищевым продуктам наиболее часто определяется у детей в возрасте от 3 до 7 лет, несколько реже - у детей старше 7 лет и у детей до 3-х лет. Среди клинических форм пищевой аллергии процент положительных результатов кожных проб определяется чаще у больных дермореспираторным синдромом, и значительно реже - у больных атопическим дерматитом. Основные проблемы, возникающие при кожном тестировании:
1. Ложноотрицательные результаты проб, причинами которых являются:
> отсутствие 1дЕ-опосредованных реакций;
> псевдоаллергические реакции;
> малый диапазон исследуемых аллергенов;
> некачественные аллергены;
> снижение реактивности кожи (ранний детский возраст).
2. Ложноположительные результаты проб, причинами которых являются:
> псевдоаллергические реакции (изменение свойств аллергенов, использование различных концентраций одного и того же аллергена);
> повышенная чувствительность кожи;
> перекрестно-реагирующие аллергены (особенно характерно для аллергенов, принадлежащих одному виду: молоко - говядина; яйцо- курица).
Анализ результатов собственных исследований показал, что диагностическая значимость скарификационных кожных проб и анамнеза при положительных провокационных пробах для различных аллергенов различна (рис.25). Наиболее высокая информативность кожных тестов характерна для полноценных аллергенов (в основном термостабильных), таких как: коровье молоко, куриное яйцо, рыба, пшеница, орехи. И совсем иную диагностическую значимость кожных проб мы обнаружили для растительных аллергенов (в основном термолабильных), таких как фрукты и овощи. У больных, имеющих положительные результаты кожных проб к данным аллергенам, провокационные пробы чаще всего были отрицательными. Как правило, это наблюдали у пациентов с сопутствующей пыльцевой сенсибилизацией, что объясняется наличием
общих антигенных детерминант между пыльцевыми аллергенами и пищевыми продуктами с развитием перекрестных аллергических реакций.
| курица |
| - пробы +пробы |
Аллергические диагностические пробы
— методы диагностики аллергии. Проводятся после того, как путем тщательного сбора анамнеза выявлен круг подозреваемых аллергенов.
Пробы выполняют вне фазы обострения заболевания и не раньше чем через 2—3 недели после перенесенной острой аллергической реакции, т.к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается.
В зависимости от методики проведения кожные пробы могут быть
прямыми и непрямыми.
При прямых кожных пробах
аллерген вводят внутрикожно или повреждая эпидермис путем укола, царапины. При капельных и аппликационных прямых кожных пробах
аллерген (обычно лекарственный препарат или вещество) наносят на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. Ответная кожная реакция считается положительной при появлении гиперемии, инфильтрации или волдыря. Она может возникнуть в течение 20 минут (немедленная реакция), через 6—12 ч (реакция переходного типа), через 24—48 ч (замедленная реакция). Тип ответной кожной реакции зависит от характера иммунологического механизма аллергической реакции (см. Аллергия).
Среди прямых кожных проб
различных видов наиболее чувствительной является внутрикожная, затем следуют скарификационная, укол, аппликационная, капельная.
К непрямым кожным пробам
относится реакция Прауснитца — Кюстнера, при которой сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому человеку и после фиксации антител на коже реципиента (через 24 ч) в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии антител-реагинов в исследуемой сыворотке. Данная реакция не исключает возможности переноса с сывороткой крови возбудителя при наличии скрытой инфекции у донора, поэтому применение ее ограничено.
Наиболее целесообразно выявлять антитела-реагины с помощью различных реакций иммунитета — иммуноферментного метода и др.. Выбор вида кожной пробы зависит от заболевания, предполагаемой степени чувствительности, характера аллергена, а также от реактивности кожи. Прием некоторых лекарственных препаратов (антигистаминных, седативных средств) резко уменьшает реактивность кожи, поэтому перед аллергологическим обследованием необходимо в течение 5—7 дней воздержаться от приема этих лекарственных средств.
В диагностике аллергических болезней нельзя полностью полагаться на кожные пробы и переоценивать их результаты. Постановку кожных проб и оценку их результатов проводит только специально обученный медперсонал.
При несоответствии данных аллергологического анамнеза и результатов кожных проб в период ремиссии показаны провокационные пробы
. Эти пробы основаны на воспроизведении аллергических реакций введением аллергена в орган или ткань, поражение которых является ведущим в картине заболевания.
Различают конъюнктивальные, назальные и ингаляционные провокационные пробы
.
Конъюнктивальная провокационная проба
проводится путем закапывания аллергена в нижний конъюнктивальный мешок. Реакция считается положительной при появлении гиперемии конъюнктивы, слезотечения и зуда век.
Назальную провокационную пробу
осуществляют при аллергических ринитах и поллинозах: в одну половину носа закапывают аллерген, а в другую — контрольную жидкость. Реакция считается положительной при возникновении на стороне закапывания аллергена затрудненного носового дыхания и зуда.
Ингаляционный провокационный тест
применяют с целью этиологической диагностики бронхиальной астмы: с помощью аэрозольного распылителя больной вдыхает через рот раствор аллергена. Реакция считается положительной в случае снижения более чем на 15% жизненной емкости легких.
К провокационным пробам относятся также холодовая и тепловая пробы, используемые при холодовой и тепловой крапивнице. При отсутствии четких признаков заболевания проводят экспозиционную провокационную пробу
. Она основана на непосредственном контакте больного с подозреваемым аллергеном в той среде, в которой больной обычно находится.
Противоположной этой пробе является элиминационная проба
— исключение из пищевого рациона предполагаемого аллергена, перевод больного, страдающего бытовой аллергией, в так называемую безаллергенную палату и др.
Лейкоцитопеническую и тромбоцитопеническую провокационные пробы
применяют в диагностике пищевой аллергии и лекарственной аллергии. В основе этих проб лежит снижение числа лейкоцитов и тромбоцитов в крови после введения больному испытуемого аллергена.