Бактериологические исследования – одни из популярнейших способов проверки разнообразных биологических жидкостей. Если подразумевается посев крови, то речь идет об анализе, помогающем определить бактериальные инфекции в человеческом организме. Бак посев требуется тогда, когда по анализу крови обычного порядка невозможно определить присутствие бактериемии. Бак посев предполагает забор материала и дальнейшее помещение в питательную среду, в которой присутствуют компоненты, позволяющие бактериям очень быстро размножаться.
Бактериологическое исследование крови предполагает предварительное выращивание культур в питательной среде. Поэтому врачи называют такие анализы культуральные исследования. Когда по прошествии нескольких дней бактерии начинают активно расти, получившуюся пробу отправляют на микроскопическое исследование. После того как культуры выросли достаточно, бактериурию определить труда уже не составляет. Однако это еще не все анализы. В таком случае дается только предварительная оценка. Чтобы идентифицировать бактерии более точно, выполняется следующий этап. Это бак посев образцов жидкой культуры в плотную среду в чашке Петри. Такое исследование помогает определить растущие бактериальные колонии. С их образцами уже можно проводить химические тесты, которые позволят более точно определить окончательный вид микроорганизма.
Все эти этапы являются подготовительными для проверки видов бактерий на чувствительность к разного рода антибиотикам. Это требуется для поиска наиболее подходящего для борьбы с инфекцией лекарства.
При выполнении бактериологического анализа крови можно обнаружить:
- стафилококков;
- стрептококков;
- энтеробактерии;
- грибки дрожжей.
Анализы крови при бактериальной инфекции в обязательном порядке проводятся пациентам со сниженным иммунитетом. К примеру, у лиц, обладающих ВИЧ, нередко обнаруживаются бактерии туберкулеза. Такое обследование помогает исключить получение неправильных результатов.
При заболеваниях инфекционной направленности у бактерий и микроорганизмов есть возможность проникнуть в кровяной ток, попасть в другие организменные системы, которые расположены неподалеку от самого очага. Если расшифровка крови на посев демонстрирует положительный результат, значит, инфекция зашла уже далеко. Это может сопровождаться повышением температуры, повышением лейкоцитов, перебоями в сердечной работе.
Особенности анализа
Бактериологический метод исследования, как и любая другая проверка, имеет свои плюсы и минусы. Среди плюсов выделяется высокая специфичность метода. Это позволяет избежать перекрестных ложных реакций. Для исследования подойдет любая биологическая жидкость. Может выполняться посев мазка, анализ мочи, крови и т.д. Лечебной целью является определение чувствительности выявленного микроба к тому или иному средству лечебной направленности. Это позволяет быстро уничтожить микроорганизмы, не тратя время на напрасное лечение.
Безусловно, не обходится и без минусов. Среди них можно отметить то, что бакпосев требует времени на выполнение. Обычно исследуемый материл находится в лаборатории не менее недели. К забору материала предъявляются серьезные требования, важно соблюсти каждое правило забора материала для бактериологического исследований. Кроме этого, персонал лаборатории должен иметь специальную квалификацию.
Обычно результаты бактериологического исследования получаются по образцам любых биологических жидкостей человека: от слизи с носоглотки, до спинномозговой жидкости. Посев крови, как и любой другой жидкости особой подготовки к анализу не предполагает. За два-три дня рекомендуется отказаться от жирного, жареного, не принимать алкоголь. Если сдаваться будет кровь, то минимум за 12 часов нужно совершить последний прием пищи. Такая особенность сдачи именуется строго натощак. За несколько часов до сдачи запрещается курить.
Кровь на посев, когда речь идет о стерильности, берется несколько раз в определенный временной промежуток. Связано это с тем, что не всегда можно добиться заражения питательной среды по одной пробе, поэтому результативным однократный забор не считается. Говорить о том, что провокатором той или иной инфекции стал определенный микроорганизм можно только после того, как будет проведено серийное исследование, как минимум, два раза. В результате неоднократного исследования должны выявляться предполагаемые бактерии. Можно выполнить одновременную проверку не только крови, но и других биологических жидкостей.
Забирать кровь нужно при максимально высокой температуре. При этом предварительное антибиотическое лечение может смазать результаты. В крайнем случае, должно пройти не менее суток с последнего антибиотического приема. Забор крови выполняется в утренние часы.
После забора выполняется посев в питательную среду, которая благоприятна для роста бактерий. Выдерживаются такие образцы при температуре 37-38 градусов в течение нескольких суток.
На сегодняшний день выполняется два вида посева. Речь идет о посеве, позволяющем определить чувствительность к основному антибиотическому спектру и о посеве с выявлением чувствительности к широкому спектру медикаментов. Обычно на получение первых результатов требуется не менее трех суток. Порой исследование растягивается до двух недель.
Вирусная инфекция
Когда в организм попадает вирус, диагностировать наличие или отсутствие можно с помощью общего анализа крови. Обычно определить присутствие инфекции может без проблем даже сам пациент, получив на руки результаты анализов. Однако это не значит, что нужно исключать консультацию со специалистом.
Чтобы определить, что именно стало причиной инфекции вирус или бактерии, нужно внимательно ознакомиться с полученными данными. Дело в том, что структурный кровяной состав меняется по-разному, в зависимости от того, причиной заражения стал вирус или бактерии.
Если причиной плохого самочувствия стал вирус, то лейкоциты будут в норме или даже чуть ниже, в самых редких случаях наблюдается некоторое увеличение. Лимфоциты представлены выше нормы, как и моноциты. На нейтрофилы вирус действует угнетающим образом, поэтому количество их снижается. Показатель СОЭ обычно остается в норме или повышается совсем незначительно.
Даже если все описанное совпадает с вашим анализом, важно учесть и симптоматику, которая у вас проявилась. Для вирусной инфекции характерен меньший инкубационный период. Обычно он не составляет более пяти дней. При этом самостоятельная постановка диагноза должна быть исключена, поскольку порой проявление бактерий происходит на фоне развития вируса, а с определением такой этиологии не будет проблемы только у специалиста.
Разные образцы
При сборе мочи на бактериологическое исследование, предполагается сбор утренней мочи, ее средней порции. Предварительно выполняется туалет наружных половых органов. Забор осуществляется в стерильную посуду, вмещающую 10-15 мл. Доставить анализ нужно в лабораторию в течение не более чем двух часов.
Если вам предстоит исследование мазка из зева и носа, то утром запрещено чистить зубы, полоскать рот и нос с использованием дезинфицирующих растворов. Запрещено употреблять пищу и воду. Если требуется выполнить бакпосев кала, то забор испражнений осуществляется из утреннего стула с помощью стерильной лопаточки в стерильную посуду, объем анализа должен составлять 15-30 грамм. Важно чтобы в пробу не попала моча.
Доставить анализ нужно в течение пяти часов. Хранить анализ ночью или замораживать запрещается. Сбор кала с помощью клизмы и слабительного тоже должен быть исключен.
Если исследовать нужно мокроту, то сбор выполняется утром натощак в стерильный контейнер во время кашельного приступа вместе со слизью. Перед сбором допустимо почистить зубы, однако для полоскания должна использоваться только кипяченая вода. В лабораторию анализ доставляется в течение часа.
Сбор грудного молока выполняется после предварительных гигиенических процедур. Область около сосков должна быть обработана тампоном, который смачивается 70ти процентным этиловым спиртом. Первые 15 мл использовать для сдачи нельзя. Из средней порции сцеживается 5 мл. Доставка анализа должна выполняться в течение двух часов.
Если выполняется анализ отделяемого с половых органов, то для женщин действует запрет на сдачу в период менструации, должна пройти хотя бы неделя после нее. Если ранее проводился антибиотический курс, то по завершении должен пройти месяц. Предварительно выполняется туалет наружных половых органов. Желательно не мочиться в течение двух часов. Мужчинам рекомендуется растянуть время отсутствия похода в туалет до пяти часов.
Бактериологический посев – метод исследования биологического материала (кровь, моча, кал и пр.), взятого у пациента и помещенного на искусственную питательную среду, способствующую росту и размножению возбудителя заболевания. При исследовании можно выявить не только факт наличия возбудителя, но и его концентрацию. Таким образом можно исследовать, кроме уже перечисленного, спинно-мозговую жидкость (ликвор), мокроту, желчь, отделяемое из зева, носа, глаз, дыхательных путей, половых органов, ран. То есть высевать микроорганизмы можно с практически любого участка организма. Подобные методики удобны для нахождения и идентификации бактерий и грибов, вирусы обнаружить таким образом гораздо сложнее, что связано с особенностями биологии вирусов.
Бактериологические посевы позволяют не только определить типы микробов, провоцирующих то или иное заболевание, но и подобрать эффективные антибиотики (определить чувствительность микробов к ним), которые помогут выздоровлению. Только забор материала необходимо сделать до начала антибиотикотерапии. Назначать бактериологический посев могут как в поликлинике (например, всем известное исследование кала на дисбактериоз), так и в стационаре (например, при кишечных инфекциях, а также если биологический материал труднодоступен, как ликвор). После того как материал забирают у пациента, его помещают на специальные питательные среды, через 3–10 дней оценивают результаты. Распознать (идентифицировать) микроб специалисты его микробиологической лаборатории могут путем определения морфологических, культуральных, биохимических признаков. Морфологию (строение) «вредителя» изучают под микроскопом, культуральные свойства характеризуются потребностями, условиями и типом роста микроорганизмов на питательных средах. Биохимические признаки определяются набором ферментов, синтезируемых микробом в процессе жизнедеятельности. Также обращают внимание на пигменты, окрашивающие колонии микроорганизмов и питательные среды, например, золотистый пигмент образует золотистый стафилококк.
Виды анализов
Бактериологическое исследование крови
Показания: подозрение на заражение крови; длительно повышенная температура, причину которой не удается выяснить; подозрение на некоторые инфекционные заболевания (например, кишечные инфекции, эпидемический менингит, стафилококковые и стрептококковые инфекции). Взятие крови осуществляют в момент максимального подъема температуры (в этот период концентрация микроорганизмов в крови особенно высока), до приема антибиотиков (если диагноз еще не установлен) или после приема антибиотиков через 10–14 дней (чтобы проследить результаты лечения). Кровь берут у постели больного или в перевязочной и тут же засевают на питательные среды. Однократное исследование крови малорезультативно в случае обнаружения условно болезнетворных микроорганизмов, обитающих на коже человека, а при определенных условиях (при снижении защитных сил организма), способных вызвать заболевание, без проведения повторных исследований трудно понять истинность результатов. Поэтому могут быть проведены серии из 3 и более исследований за определенный промежуток времени. Утверждать, что в данном случае возбудителем является какой-либо микроорганизм, позволяет быстрое (в течение 48 часов) обнаружение микроорганизма, неоднократное выделение его из крови или одновременное выделение из других видов исследуемого материала (крови и мочи, крови и мокроты и т.п.), кроме того, его обнаружение одновременно на разных питательных средах.
Отделяемое, мазки из верхних дыхательных путей
Показания: воспалительные заболевания верхних дыхательных путей и воспаление легких без мокроты, диагностика инфекционных заболеваний дыхательных путей (дифтерии, коклюша, скарлатины), диагностика бактерионосительства при менингококковой, дифтерийной и стафилококковой инфекциях. Материал из носовых ходов забирают с помощью сухого стерильного тампона, а из зева – с помощью увлажненного стерильного ватного тампона. Мазки из носа и глотки берут разными тампонами. Материал из глотки и с миндалин забирают натощак до приема гигиенических процедур или не ранее чем через 3–4 часа после еды. При взятии мазков с задней стенки глотки и миндалин нельзя касаться тампоном языка, слизистой щек, зубов, поэтому родители должны создать условия для того, чтобы медицинской сестре было удобно работать с малышом – лучше рассказать заранее, что процедура будет очень короткой, зато удастся поймать микроб, живущий у малыша во рту, но для этого он должен открыть ротик и несколько секунд (на несколько счетов) не шевелиться.
Бактериолоическое исследование мочи
Показания: воспалительные заболевания почек и мочевого пузыря и контроль после лечения, диагностика инфекционных заболеваний (брюшного тифа, лептоспироза). Исследование мочи на флору проводится до начала антибиотикотерапии. В стерильную посуду собирают среднюю порцию свободно выпущенной мочи (3–5 мл). Средняя порция мочи меньше всего загрязнена микробами, которые могут быть на наружных половых органах, ее исследование дает более объективное представление о состоянии почек, мочевыводящих путей. Лучше всего использовать утреннюю мочу, содержащую наибольшее число бактерий. Перед взятием материала необходим тщательный туалет наружных половых органов. Мальчикам следует обнажить головку полового члена (если не было обрезания) и выпустить небольшую порцию мочи; затем выпустить порцию мочи в стерильный контейнер (последнюю часть не собирать), закрыть контейнер и передать в лабораторию. Девочкам вымыть половые органы, используя теплую мыльную воду, в направлении спереди назад; промыть половые органы еще раз теплой водой и вытереть стерильной салфеткой. Собрать среднюю порцию мочи в стерильный контейнер (он должен быть взят в лаборатории). Моча может храниться до начала исследования не более 1–2 часов при комнатной температуре и не более суток в холодильнике, так как имеется риск размножения бактерий и искажения результатов исследования.
Отделяемое ран
Показания: признаки гнойно-воспалительного процесса в ране. Взятие материала осуществляет врач. Кожу вокруг раны обрабатывают антисептиком, удаляют с помощью стерильной салфетки гной. Материал берут с помощью стерильного тампона. При наличии в ране дренажей (трубочек, по которым оттекает содержимое раны) отделяемое из них засасывают шприцем в количестве 1–2 мл и помещают в стерильную пробирку.
Бактериологическое исследование кала
Показания: диагностика кишечных инфекций, контроль при выписке больных с острыми кишечными инфекциями (дизентерия, сальмонеллез и т.д.) из стационара, диагностика хронических дисфункций кишечника, диагностика дисбактериоза кишечника, выявление бактерионосителей. Исследуемым материалом могут служить испражнения, полученные при естественной дефекации или с помощью специальных тампонов (петель). Для сбора материала путем естественной дефекации используют тщательно вымытые и лишенные следов дезинфицирующих средств судна или горшки. На дно судна, для защиты материала от следов дезинфектанта, можно поместить лист чистой бумаги. Пробу испражнений отбирают сразу после дефекации с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли, деревянного шпателя или специальной ложечки, вмонтированной в крышку стерильного контейнера, который можно получить в лаборатории. При наличии слизи, гноя, других включений нужно выбрать участки, содержащие эти примеси, но свободные от крови. Получение материала из прямой кишки с помощью ректальных тампонов (петель) осуществляется медсестрой. Ребенка просят лечь на бок с притянутыми к животу бедрами и ладонями развести ягодицы. Петля (тампон) вводится в задний проход на глубину 5–6 см. Материал собирают в пустую стерильную посуду или в пробирки с консервантом. Если консервант не применяется, то время до начала бактериологического исследования ни при каких условиях не должно превышать 2 часов. Обнаружение в испражнениях даже болезнетворных микроорганизмов не всегда свидетельствует о наличии заболевания, а может быть обусловлено бактерионосительством. Поэтому оценка результатов должна проводится с учетом проявлений заболевания. Для правильной оценки результатов рекомендуется проведение 2–3-кратных исследований с интервалом 1–2 дня. Диагностика дисбактериоза кишечника осуществляется на основании оценки качественных и количественных сдвигов в составе микрофлоры толстого кишечника. Следует отметить, что значение имеет не только состояние микробной флоры кишечника в данный конкретный момент времени, но и происходящие в кишечнике изменения. Поэтому для более точной оценки состояния кишечной микрофлоры исследования также необходимо повторить несколько раз. На достоверность полученного результата сильно влияет соблюдение сроков транспортировки материала. В ряде случаев, когда соблюдение этих сроков нереально, следует либо отказаться от определения численности бактерий, либо с осторожностью подходить к информации о снижении их количества.
Ликвор
Показания: подозрение на менингит (воспаление мягкой мозговой оболочки). Ликвор (спинно-мозговую жидкость) получают путем люмбальной пункции (получения спинно-мозговой жидкости из канала спинного мозга), реже при пункции боковых желудочков мозга (в этом случае спинно-мозговую жидкость получают из так называемых желудочков головного мозга, делая прокол за наружным слуховым проходом). Взятие ликвора проводит врач, эта процедура всегда проводится только в стационаре. Ликвор в норме стерилен, поэтому значимым может быть факт находки любого микроорганизма. У детей менингиту часто сопутствует бактериемия – наличие возбудителя в крови, поэтому проводят одновременное исследование крови и ликвора.
Результаты бактериологического исследования
Правильно прочитать результат исследования может только врач. В ряде случаев имеет значение не сам факт обнаружения тех или иных микроорганизмов, а их количество. Часто количество играет роль и для прогноза заболевания, характера лечения. Так, например, в мочевом пузыре в норме моча стерильна, но во время прохождения через нижнюю треть мочеиспускательного канала происходит ее контакт с нормальной микрофлорой, и о наличии патологического процесса говорят только в том случае, когда титр возбудителя (его количество) составляет более 10 4 кое/мл. Оценка количества микроорганизмов в раневом отделяемом важна для прогнозирования течения процесса. Установлено, что при уровне микробной обсемененности раны выше 105 кл (микробных клеток) на 1 г ткани (на 1 мл отделяемого) нагноение развивается даже в жизнеспособных тканях. В случае наличия в ране отмерших тканей, гематом, инородных тел развитие гнойного процесса возможно и при более низких уровнях обсемененности. Кроме того, при уровнях обсемененности раны более 105 кл на 1 г раневого отделяемого резко возрастает угроза развития сепсиса. По результатам обследования так или иначе изменяют схемы лечения. В заключение отметим, что результат любого анализа, в том числе и бактериологического, может быть ошибочным, поэтому врач может назначить подтверждающие или уточняющие исследования, например, полимеразную цепную реакцию (ПЦР) для определения ДНК возбудителя и др.
Классическое бактериологическое исследование - «золотой» стандарт микробиологической диагностики.
Цель бактериологического исследования - выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация.
Алгоритм бактериологического исследования:
Первичная микроскопия исследуемого материала (необязательный этап, в зависимости от характера материала);
Первичный посев с целью выделения чистой культуры;
Накопление чистой культуры;
Изучение комплекса биологических свойств выделенной культуры;
Окончательная идентификация возбудителя.
1-й день исследования
1. Первичная микроскопия
Результат первичной микроскопии дает ориентировочное представление о наличии в клиническом материале различных морфологических форм микроорганизмов, а также позволяет провести их первичную идентификацию по морфолого-тинкториальным свойствам и существить выбор сред для первичного посева.
Гнойное отделяемое - первичная микроскопия обязательна.
Спинномозговая жидкость - первичная микроскопия осадка обязательна.
Мокрота - первичную микроскопию проводят из разведений 10 4 -10 5 .
Мазки из зева и носа - первичную микроскопию не проводят.
Кровь - первичную микроскопию не проводят.
Фекалии - первичную микроскопию не проводят.
2. Первичный посев
Исследуемый материал после первичной микроскопии или без нее (фекалии, моча, мазок из носа и зева, кровь) засевают на соответствующие среды, для выделения чистой культуры:
Сахарный бульон, кровяной агар - для стрептококков;
Желточно-солевой агар, кровяной агар - для стафилококков;
Среда Эндо - для бактерий семейства Enterobacteriaceae;
МПА (мясо-пептонный агар) - для грамотрицательных бактерий;
МПА (посев по методу Шукевича) - для выделения протея;
Среда Китта-Тароцци - для выделения анаэробов;
Среда Сабуро - для выделения грибов.
Посев является первым этапом бактериологического исследования (если не проводят первичную микроскопию).
Посев осуществляется следующим образом:
Посев штрихом с обжигом петли. Материал забирают прокаленной бактериологической петлей и штрихом густо засевают верхнее поле чашки. Далее петлю опять прокаливают и вносят в густо засеянный сектор и проводят 2-3 вертикальные линии по всей чашке. После этого чашку переворачивают, густо засеянный сектор остается на нижнем поле чашки. Петлю опять прокаливают, и посев разносят по чашке 2-3 горизонтальными штрихами.
Посев шпателем. Материал наносят на поверхность среды шпателем или пипеткой, а затем шпателем рассеивают по всей поверхности.
Посев тампоном. Для посева тампон с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в питательную среду.
Посев по секторам. При таком посеве дно чашки расчерчивают на секторы, посев проводят штриховыми движениями от края чашки к центру и по секторам.
2-й день исследования
1. Проводят учет роста на питательных средах как однородный или неоднородный.
2. Проводят описание культуральных свойств.
Алгоритм описания колоний
В результате роста на питательной среде образуются колонии (потомки одной клетки). Отбирают изолированные колонии и изучают их - начинается второй этап исследования, направленный на изучение культуральных свойств бактерий. Знания этих свойств необходимы для идентификации полученной чистой культуры, так как каждому виду микроорганизмов при росте на определенной питательной среде соответствуют определенные культуральные свойства.
Колонии изучают:
Макроскопически: невооруженным глазом в проходящем и отраженном свете;
Микроскопически: при малом увеличении сухой системы микроскопа.
В проходящем свете изучают:
Величину колоний (крупные, средние, мелкие, карликовые);
Форму колоний (правильная, неправильная, круглая);
Прозрачность колоний (прозрачная, непрозрачная).
В отраженном свете определяют:
Цвет (бесцветные или окрашенные);
Характер поверхности (гладкая, бугристая, блестящая, шероховатая);
Высоту колоний над поверхностью среды (вдавленная, плоская, возвышающаяся).
Микроскопически оценивают:
Край (ровный, неровный);
Структуру (гомогенная, негомогенная).
Изучение колоний заканчивается приготовлением мазка, окраской его по методу Грама и микроскопией.
При взятии материала из колонии для приготовления мазка оценивают ее консистенцию (мягкая, слизистая, сухая).
Если при микроскопии культура оказалась чистая, то ее пересевают на скошенный агар для накопления.
3-й день исследования
1. Описание характера роста на скошенном агаре:
Однородный, неоднородный;
По штриху, сплошной, сливной.
2. Проверка чистоты накопленной культуры. Готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Если накоплена чистая культура, то она подвергается дальнейшей идентификации. Идентификация бактерий до рода и вида основана на изучении особенностей метаболизма - биохимическая идентификация и антигенного строения - серологическая идентификация.
3. Изучение биохимических свойств. Биохимические свойства - способность бактерий расщеплять те или иные субстраты за счет продукции соответствующих ферментов. Для изучения биохимических свойств используют дифференциально-диагностические среды, содержащие различные субстраты (пестрый ряд). В их состав входят среды Гисса с углеводами, лакмусовое молоко, желатин, среды с аминокислотами, МПБ (мясо-пептонный бульон) с индикаторами на сероводород и индол.
Сахаролитические свойства изучают на средах Гисса. В их состав входят пептонная вода, субстрат-углевод (различные моно- и полисахариды), многоатомные спирты и индикатор.
Если у бактерий есть ферменты, расщепляющие субстрат-углевод, то они выделяют продукты метаболизма (кислоту или кислоту и газ). При кислотообразовании индикатор меняет цвет среды, при газообразовании регистрируют разрывы среды.
Протеолитические свойства изучают при посеве на желатин и лакмусовое молоко. Если у бактерий есть протеазы, то желатин разжижается. В молоке появляется сгусток кремового цвета, а над ним жидкость - пептонизация молока (за счет того, что протеазы бактерий расщепляют казеин молока до пептона).
Пептолитические свойства. Чаще бактерии способны расщеплять промежуточные продукты распада белков - пептоны. Продукты этого процесса: амины (скатол, индол), аминокислоты, газы (сероводород, аммиак, углекислый газ). Их можно обнаружить с помощью индикаторной бумаги:
Лакмусовая - для выявления аммиака;
Смоченная щавелевоуксусной кислотой - для выявления индола;
Смоченная ацетатом свинца - для выявления сероводорода. Продукты дезаминирования и декарбоксилирования аминокислот обнаруживают с помощью тест-полос, изменяющих свой цвет при изменении рН среды.
4-й день исследования
1. Проводят учет результатов биохимических тестов. После того как культура идентифицирована до вида, у нее изучают ряд дополнительных признаков, таких как чувствительность к антибиотикам, токсигенность, наличие факторов вирулентности, плазмидный профиль, а также проводят внутривидовую дифференцировку.
2. Результаты биохимической идентификации служат основанием для проведения серологической идентификации. Серологическую идентификацию выделенной культуры проводят в реакции агглютинации на стекле с помощью соответствующих иммунных адсорбированных сывороток, выбор которых определяется результатами биохимической идентификации.
Внутривидовая дифференциация - определение принадлежности штамма к тому или иному фаговару, бактериоциногеновару, бактериоциновару, биовару, резистовару и т.д. Она позволяет выявить эпидемиологические связи между штаммами одного вида.
Идентификация выделенной культуры позволяет сделать заключение о том, какой микроорганизм служит этиологическим фактором заболевания. При выделении условно-патогенных бактерий необходимо соблюдать критерии этиологической значимости:
Присутствие бактерий в материале из патологического очага в количестве не менее 10 5 КОЕ мл /г;
Повторное выделение из материала той же культуры;
Нарастания титра Ат в сыворотке крови больного к аутоштамму в 4 раза и более.
Определение фаговаров бактерий (фаготипирование)
Определение фаговаров проводят по эпидемиологическим показаниям для установления эпидемиологических связей между заболевшими. Для проведения исследования берут чашки Петри с МПА, подсушивают поверхность, расчерчивают дно на квадраты и маркируют. Далее 3-4-часовую культуру в бульоне засевают газоном, подсушивают и на каждый квадрат наносят каплю соответствующего типового фага в рабочем разведении. Посевы помещают в термостат на сутки. Через 24ч учитывают спектр чувствительности культуры к определенным фагам по литическому действию.
определение бактериоциновара
Для определения бактериоциновара определяют чувствительность исследуемых штаммов к эталонным бактериоциноварам. Как и фаго- типирование, его проводят по эпидпоказаниям.
Для проведения исследования соответствующие стандартные культуры-продуценты типовых бактериоцинов засевают на питательные среды. Посевы помещают в термостат при 37 °С на 48 ч.
Выросшие колонии индикаторных культур инактивируют хлороформом, после чего на поверхность наливают 2-4 мл расплавленного агара, в который предварительно вносят 0,2 мл исследуемой 4-часовой бульонной культуры. После того как агар застыл, посевы вновь помещают в термостат на 18-24 ч. Через указанное время учитывают наличие зон задержки роста вокруг индикаторных культур, тем самым определяют бактериоциновар изучаемых бактерий.
©2015-2019 сайт
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2016-04-27
Для получения достоверного результата анализ должен проводиться не менее чем через 2 недели после последнего приема антибиотиков и (или) антибактериальных препаратов.
- Соскоб из уретры рекомендуется сдавать через 2 часа после последнего мочеиспускания, из зева и носоглотки – натощак (через 4-5 часов после последнего приема пищи, при этом необходимо исключить чистку зубов и полоскание рта), для других локусов специальной подготовки не требуется.
- Моча. Исследованию подлежит средняя порция свободно выпущенной мочи, в количестве 3-5 мл в стерильный пластиковый одноразовый контейнер (контейнер можно получить в регистратуре) после тщательного туалета наружных половых органов без применения антисептиков. Срок доставки в лабораторию при комнатной температуре – 1-2часа, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
- Сперма для бактериологического исследования собирается в стерильный пластиковый одноразовый контейнер с широким горлом путем мастурбации (контейнер можно получить в регистратуре). Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов.
- Мокроту рекомендуется собирать с утра, натощак после санации ротовой полости, в стерильную пластиковую посуду. Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
- Забор секрета предстательной железы осуществляет врач-уролог, после предварительного массажа простаты (данная манипуляция выполняется только в Центральном офисе). Перед забором секрета предстательной железы рекомендуется половое воздержание в течение не менее 2-х дней.
- Бактериологическое исследование грудного молока . Забор грудного молока проводится только до кормления ребенка или через два часа после его кормления грудью. Обследуемая пациентка обмывает левую и правую грудную железу теплой водой с мылом и насухо вытирает чистым полотенцем. Поверхность сосков и кончики пальцев обрабатывает ваткой, умеренно смоченной 70 % этиловым спиртом. Первая порция грудного молока, приблизительно в количестве 0,5 мл, сбрасывается. Затем, не касаясь соска руками, женщина сцеживает 0,5 – 1 мл молока из каждой железы в отдельный стерильный контейнер (контейнеры можно получить в регистратуре). Сроки доставки в лабораторию при комнатной температуре – 1-2 часа, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
- Забор синовиальной жидкости для бактериологического исследования осуществляется врачом в стерильную пластиковую посуду (контейнер можно получить в регистратуре). В условиях лаборатории эта процедура не выполняется. Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
- Забор раневого отделяемого для бактериологического исследования осуществляется врачом, в одноразовый контейнер со средой Эймса (контейнер можно получить в регистратуре). Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 6 часов, при температуре 2-8°С – до 2 суток.
- Желчь для бактериологического исследования собирается при зондировании, отдельно, по порциям А, В и С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики (в лаборатории эта процедура не выполняется). Срок доставки материала в лабораторию при комнатной температуре в течение 1-2 часов, при температуре 2-8°С – 5-6 часов.
Бактериологическое исследование - это исследование, предназначенное для выделения и изучения их свойств с целью постановки микробиологического диагноза.
Исследуемый материал следует брать в асептических условиях в стерильную посуду и доставлять в лабораторию возможно скорее. В случае необходимости пробы следует хранить на холоде. Методика взятия проб зависит от объекта, характера заболевания и свойств микроорганизма. Одним из распространенных приемов бактериологического исследования является бактериоскопия.
Для изучения нефиксированных бактерий пользуются двумя методами: раздавленной (между предметным и покровным стеклами) капли и . Следует помнить, что препараты нефиксированных бактерий заразны.
Для бактериоскопии фиксированных препаратов используют мазки. Для их приготовления каплю исследуемой жидкости распределяют по поверхности предметного стекла, а затем высушивают. Наиболее распространенным методом фиксации препарата является пронесение его через пламя газовой горелки. В некоторых случаях используют фиксирующие составы. Фиксированные препараты, как правило, окрашивают (см. Окраска микроорганизмов). К числу важнейших элементов бактериологического исследования относятся посевы и пересевы , производимые бактериальной петлей или пастеровской пипеткой. Петлю стерилизуют прокаливанием в пламени, затем ее остужают прикосновением к участку незасеянного агара или ополаскивая в стерильной жидкости. При использовании пастеровской пипетки ее кончик обламывают пинцетом, несколько раз проносят пипетку через пламя горелки и дают остыть. При посевах используют жидкие и твердые питательные среды. При посеве на скошенный агар культуру бактерий растирают петлей по поверхности агара. При посеве в толщу агарового или желатинового столбика питательную среду прокалывают до дна пробирки петлей или особой иглой. При посеве в жидкую среду надо следить, чтобы жидкость не выливалась и не смачивала края пробирок и пробки. Посевы и пересевы следует проводить вблизи пламени газовой горелки, пробирки не должны долго оставаться открытыми, петля или пастеровская пипетка с культурой не должна ни к чему прикасаться; перед тем как закрывать пробирку, края ее следует прожечь. Засеянные пробирки необходимо тотчас же надписать.
Важнейшим этапом бактериологического исследования является идентификация - определение видовой или типовой принадлежности бактерий, полученных в виде чистой культуры. При идентификации бактерий производится изучение их физиологических и биохимических свойств, токсинообразования. Широко используют серологические методы идентификации бактерий (реакции и ). Во многих случаях эффективным оказывается биологический метод идентификации микроорганизмов, основанный на заражении лабораторных животных исследуемым материалом или полученной культурой бактерий и выявлении у животных характерных патологических изменений.
Для выделения чистых культур используют механические и биологические методы. Пример механического метода: каплю исследуемого материала растирают одним и тем же стерильным шпателем или бактериальной петлей по поверхности плотной питательной среды, последовательно в первой, второй и третьей . Выделение чистой культуры производится из выросших отдельных колоний и заключается в их исследовании и отсеве на свежую питательную среду. Биологические методы выделения чистых культур основаны на учете того или иного свойства выделяемого микроба, отличающего его от других микробов, находящихся в исследуемом материале.
При биологическом методе используют такого рода питательные среды, в которых созданы условия, благоприятные для развития определенного вида микробов. К числу биологических методов относится также заражение лабораторных животных, чувствительных к выделяемому виду бактерий.
Бактериологическое исследование - комплекс методов для выявления патогенных микроорганизмов у больного, у носителя или на объектах внешней среды. Бактериологические исследования пользуются также для обнаружения условно патогенных и санитарно-показательных микробов, характеризующих степень загрязнения внешней среды, для изучения микробного пейзажа определенной среды (объекта). Бактериологическое исследование может быть использовано для диагностики, профилактики инфекционных заболеваний, для санитарно-гигиенической характеристики среды, окружающей человека, для научного исследования.
Материал и метод бактериологического исследования зависят от цели анализа, условий среды, патогенеза и течения заболевания. При наличии бактериемии микроб обнаруживают при помощи посева крови. В случаях выраженных местных поражений возбудителя следует искать в отделяемом или выделениях пораженного органа (дифтерия, дизентерия, гонорея и др.). Наконец, при заболеваниях со сложным течением, когда (как, например, при брюшном тифе) бактериемия сменяется поражениями тонких кишок, на каждом этапе применяют соответствующий метод исследования: в течение первой недели заболевания производят посев крови, на второй наиболее достоверно серологическое исследование, начиная с третьей недели положительный результат получают при посеве испражнений; последним методом пользуются и в качестве контрольного исследования для обнаружения бактерионосителей среди реконвалесцентов и для наблюдения за ними.
Выполнение любой из указанных задач осуществляют применением методов, предназначенных для выделения и определения микроорганизмов. В зависимости от характеристики микроба используют весь комплекс методов или его части.
Бактериоскопия - наиболее достунный прием, основанный на микроскопическом изучении материала. При микроскопии свежих препаратов можно пользоваться некоторыми микрохимическими реакциями (например, окраска йодофильных бактерий раствором Люголя) или избирательной окраской разных структурных частей бактерий.
Более четко бактерии можно выявить в окрашенном препарате. Исследуемый материал наносят на предметное стекло тонким и по возможности ровным слоем. Дают препарату высохнуть на воздухе и фиксируют одним из общепринятых методов, но чаще всего фламбированием, т. е. двух-, трехкратным быстрым проведением препарата над пламенем горелки так, чтобы стекло было теплое, но не горячее. Препарат, остуженный после фиксации, окрашивают простой или дифференциальной окраской (см. Окраска микроорганизмов). При флюоресцентной микроскопии используют как нативные, так и сухие препараты. В этом случае обработка определенными красителями вызывает свечение структур микробного тела или всего микроба в ультрафиолетовых или коротких синих лучах. В другой модификации микробов обрабатывают специфическими сыворотками, меченными флюоресцентами (красителями). Бактерии, соответствующие сыворотке, будут светиться, так как на них осядет меченая сыворотка. Гетерологичные бактерии не будут светиться.
Методом бактериоскопии широко пользуются для бактериологической диагностики некоторых инфекционных заболеваний (гонорея, туберкулез, возвратный тиф), а также при изучении всего комплекса микрофлоры органа (миндалины, влагалище), продукта или другого объекта.
Метод посева, т. е. выделение чистой культуры искомого микроорганизма, является более точным и надежным способом бактериологической диагностики, чем бактериоскопия. Свежий материал размазывают по поверхности плотной питательной среды, налитой в чашки Петри. Первичный посев производят на обычные среды, благоприятные для данного микроба, на дифференциальные или на селективные среды. Выбор питательной среды (см.), как и метода предварительной обработки свежего материала для посева, зависит от степени его загрязнения сопутствующей посторонней микрофлорой. Через 24-48 час. содержания в термостате при оптимальной для данного микроба температуре чашки рассматривают и подозрительные колонии пересевают на среды, способствующие размножению данного возбудителя. Таким образом получают культуру однородных бактерий, которые и должны быть идентифицированы.
Идентификация микроба начинается с изучения его морфологии в окрашенном препарате и в раздавленной капле (см.) для определения формы микробов и их подвижности. Следующим этапом является исследование ферментативной способности бактерий по расщеплению углеводов, аминокислот, мочевины в определенных для каждого вида сочетаниях. У бактерий наиболее изучены сахаро- и протеолитические ферменты.
Идентификация микроба должна быть дополнена изучением других свойств, характерных для каждого рода и вида микроорганизмов. К таким свойствам относится способность выборочно растворять эритроциты разных животных (гемолиз), свертывать плазму крови (плазмокоагуляция), растворять сгусток фибрина (фибринолиз) и пр. Все эти особенности бактерий могут быть использованы при их определении как дифференциальные признаки.
Окончательное определение микробов некоторых видов, в основном патогенных бактерий семейства кишечных, включает серологическую идентификацию (см. Идентификация микробов). Обычно для этого ставят реакцию агглютинации, т. е. выявляют скучивание бактерий под влиянием одноименной иммунной сыворотки. Агглютинация микробов в сыворотке против определенного вида указывает на принадлежность к этому виду. Обычно реакцию агглютинации ставят ориентировочно на стекле и для окончательного определения в пробирках с разведениями сыворотки.
Ряд микробов не удается определить до конца описанным путем. Тогда идентификацию необходимо дополнить заражением лабораторных животных, поскольку для некоторых бактерий характерна патогенность или токсигенность, выявляющаяся при заражении животных. В некоторых случаях заражение животных служит также методом накопления патогенных микробов.
Только сопоставление всех характеристик культуры, собранных при изучении морфологии, биохимических, серологических, а где нужно и биологических свойств ее, может дать основания для идентификации. Ответ при положительном результате исследования не представляет затруднений, если выделенный микроб типичен. В таком случае указывают род, вид и, если определялся, тип бактерии. При выделении микроба, отклоняющегося по каким-то свойствам от типичной характеристики, дается ответ с указанием на отклоняющийся признак. В таком случае полезно повторить исследование, если позволяет течение болезни или условия сбора материала. Полезно также подвергнуть культуру атипичных микробов дополнительному изучению другими, более сложными методами.
Отрицательные результаты бактериологического исследования имеют относительное значение и показывают лишь, что в исследованной порции материала искомые микробы не содержались или были нежизнеспособны. Однако они могут присутствовать в другой порции. По этому, например, при обследовании на бациллоносительство (брюшной тиф, дизентерия, дифтерия) требуется проводить повторные исследования.