Гуморальный иммунитет оценивают с помощью определения количества В-лимфоцитов, концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов М, G, А и титров сывороточных антител к различным антигенам. Сюда же относится выявление гетерофильных антител к кишечной палочке и стафилококку, а также тесты на иммунные комплексы антиген - антитело.
Метод комплементарного розеткообразования. Метод учитывает тот факт, что на мембране В-лимфоцитов расположены рецепторы к Fc-фрагментам иммуноглобулинов и к третьему компоненту комплемента.
Нагружая эритроциты человека иммуноглобулинами или комплексом иммуноглобулинов и комплемента, добиваются соединения эритроцитов с В-лимфоцитами. Как и при подсчете Т-лимфоцитов, розеткообразующим считается лимфоцит, к которому прикреплено не менее трех эритроцитов.
На мембране В-лимфоцитов имеются также рецепторы к эритроцитам мыши. В связи с этим ряд авторов предлагают определять число В-лимфоцитов с помощью метода спонтанного розеткообразования с эритроцитами мыши. Более точные методы выявления В-лимфоцитов основаны на обработке лимфоцитов флюоресцентными антииммуноглобулиновыми сыворотками против того или иного класса иммуноглобулинов.
При этом подсчет В-лимфоцитов производят с помощью флюоресцентного микроскопа или автоматического лазерного сортера клеток с использованием моноклональных антител. В периферической крови здорового человека В-лимфоциты составляют 10 - 30% общего числа лимфоцитов, или 100 - 900 клеток в 1 мм 3 крови.
Определение концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови.
Наибольшее распространение получил метод радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини. Принцип метода заключается в том, что образцы исследуемых сывороток помещают в лунки агара, содержащего антитела против того или иного класса иммуноглобулинов. Иммуноглобулины из сыворотки диффундируют в агар и взаимодействуют с антителами, образуя кольца преципитации. О содержании иммуноглобулинов в сыворотке судят по величине диаметра кольца преципитации.
Существует также методика определения концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови с помощью лазерной нефелометрии. Она предполагает использование моноспецифических кроличьих антисывороток против иммуноглобулинов человека, отличается высокой точностью и быстротой исполнения.
Нормальным считается следующее содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови здорового человека:
М - 0,5 - 2 г/л, G - 7 - 20 г/л, А - 0,7 - 5 г/л.
Определение изогемагглютининов (альфа-, бета) и гетерофильных антител. Уровень изогемагглютининов определяют с помощью эритроцитов человека АВ (IV) группы крови, а для определения титра гетерофильных антител в качестве антигенов используют убитую культуру кишечной палочки, стафилококка, стрептококка и других часто встречающихся микробных тел.
Реакцию агглютинации ставят с сывороткой крови человека в разных разведениях, кратных 2. Метод полуколичественный и позволяет учитывать последнее разведение сыворотки, в которой видна агглютинация.
Изучение антителогенеза после активной иммунизации. Этот метод используют редко. Он доступен только в условиях клиники и применяется для решения вопроса о полноценности иммунного ответа.
Обследуемого больного активно иммунизируют различными убитыми вакцинами:
дифтерийной, столбнячной, пневмококковой, менингококковой и др. По величине титров антител в сыворотке крови определяют полноценность иммунного ответа. Эти исследования противопоказаны при заболеваниях почек, печени, аллергических состояниях и у онкологических больных.
РБТЛ, стимулированная специфическими для В-лимфоцитов митогенами.
Специфичным для В-лимфоцитов является митогенлаконоса, принцип реакции аналогичен таковой для Т-лимфоцитов.
Биопсия лимфатических узлов, костного мозга, участков слизистой оболочки тонкого кишечника. Эту процедуру проводят с целью гистологического обнаружения плазматических клеток, наличия и структуры лимфоидных фолликулов.
Дефектность гуморального иммунитета принято определять как по уменьшению числа В-лимфоцитов, так и по понижению концентрации иммуноглобулинов и титров антител. Кроме того, наблюдаются дисфункции, при которых развиваются дисгаммаглобулинемии, характеризующиеся повышением концентрации иммуноглобулинов одного из классов и понижением содержания иммуноглобулинов других классов.
Понижение или повышение концентрации иммуноглобулинов одного или двух классов возникает также на фоне нормального содержания других классов иммуноглобулинов. Успех коррекции подобных расстройств зависит от правильности клинического диагноза и рационального лечения основного заболевания с применением иммунотропных препаратов.
«Коррекция иммунитета у больных раком
предстательной железы», В.А.Савинов
-количественная оценка:
1. Определение количества В-лимфоцитов методом ЕАС – розеткообразования (ЕАС-РОК).
Принцип метода: аналогичен реакции розеткообразования для выявления Т-лимфоцитов, но вместо эритроцитов барана используются эритроциты быка (Е), нагруженными антителами (А) и комплементом (С). Взаимодействие обусловлено наличием у В-лимфоцитов рецепторов к комплементу.
2. Определение числа В-лимфоцитов (CD20+ или CD19+) с помощью ИФА и проточной цитометрии.
- качественная (функциональная) оценка :
1. Определение концентрации иммуноглобулинов в реакции преципитации по Манчини и ИФА.
Принцип метода по Манчини: образцы исследуемой сыворотки помещают в лунки агарового геля, который содержит антитела против иммуноглобулина определенного класса. Иммуноглобулины, диффундирующие в агар, при взаимодействии с соответствующими антителами образуют кольца преципитата, диаметр которых пропорционален концентрации иммуноглобулинов соответствующего класса в исследуемой сыворотке. Концентрацию иммуноглобулина определяют по заранее построенному с помощью эталонных сывороток графику (калибровочной кривой).
2. Определение функциональной активности лимфоцитов с помощью РБТЛ на В-митоген.
3. Определение продукции ИЛ-6 с помощью ИФА и проточной цитометрии.
КОЖНЫЕ АЛЛЕРГИЧЕСКИЕ ПРОБЫ
Применяются для выявления ГЗТ (инфекционной аллергии). ГЗТ – реакция, опосредованная Т-лимфоцитами играют важную роль в патогенезе многих инфекций (туберкулеза, лепры, бруцеллеза, сифилиса и др.).
Для постановки аллергических проб применяются аллергены (корпускулярные и растворимые):
Растворимые аллергены - отдельные фракции клеточной стенки, выделенные из микробов:
1) очищенный туберкулин (ППД-Л) – очищенный белок (низкомолекулярный белок) туберкулезной палочки. Применяется для выявления аллергии к возбудителю туберкулеза (проба Манту);
2) аллерген бруцеллезный (бруцеллин) – полисахаридно-белковый комплекс B. аbortus. Применяется для выявления аллергии к возбудителю бруцеллеза.
3) аллерген сибироязвенный (антраксин) – белковонуклиосахаридный комплекс. Применяется для выявления аллергии к возбудителю сибирской язвы.
Корпускулярные аллергены (взвесь убитых микробов):
1) аллерген туляримийный (тулярин) применяется для выявления аллергии к возбудителю туляремии.
2) лепромин применяется для выявления аллергии к возбудителю лепры.
Принцип метода: внутрикожно или накожно в ладонную поверхность предплечья вводится небольшое количество аллергена. При наличии инфекционной аллергии через 24-48-72 час. Развивается инфекционная аллергия в виде гиперемии, инфильтрата, отека кожи (рис.17).
Рис. 17. Механизм ГЗТ.
ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ
Выберите один правильный ответ
1. С какой целью применяется реакция Кумбса?
1) для обнаружения опсонинов;
2) для обнаружения неполных антител;
3) для установления вида микроорганизма;
4) для определения серовара микроорганизма;
5) для обнаружения антитоксинов.
2. Укажите механизм первой стадии серологической реакции
1) агглютинация;
2) преципитация;
3) соединение АГ с АТ;
5) связывание комплемента.
3. Какую реакцию можно использовать для оценки состояния Т-звена иммунной системы?
3) проточную цитометрию;
4) опсоно – фагоцитарную реакцию.
4.Какой феномен серологических реакций наблюдается, если антигеном является экзотоксин?
1) преципитация;
2) агглютинация;
3) опсонизация;
5) нейтрализация.
5. ЕАС-РОК основан на выявлении…
1) С3 рецептора В-клеток;
2) С3 рецептора А-клеток;
3) рецепторов к эритроцитам;
4) Fс-рецепторов.
6. ЕА-РОК основан на выявлении…
1) С3 рецепторов В-клеток;
2) Fc-рецепторов А-клеток;
3) Fc-рецепторов Т-клеток;
4) рецепторов к эритроцитам.
7. Назовите компоненты системы комплемента, обладающие опсонизирующими свойствами
8.Назовите компоненты системы комплемента, обеспечивающие литическое действие
4) С3А, С3В;
9.Рабочая доза комплемента равна …
1) титру комплемента;
2) титру, сниженному на 25-30%;
3) титру, увеличенному на 25-30%;
4) 1/2 титра.
10. Назовите маркера Т-киллеров
11. Активацию Т – лимфоцитов вызывает…
1) митоген Лаконоса;
2) липополисахарид;
3) фитогемагглютинин;
5) поливинилпирролидон.
12.Лимфобласт – это…
13. Назовите цитокина Т-хелпера, стимулирующего пролиферацию и дифференцировку других субпопуляций Т-клеток
1) интерлейкины;
14. В реакции агглютинации участвует антиген…
1) растворимые;
2) корпускулярные;
15. Повышением чувствительности бактерий к фагоцитозу является реакция…
1) агглютинации;
2) нейтрализации токсина;
3) опсонизации;
4) связывание комплемента;
5) преципитации.
16. Какие антигены участвуют в реакции агглютинации?
2) полисахариды;
3) экзотоксин;
4) микробные клетки.
17. Назовите антигены - маркеры Т-киллеров
18. Какая реакция применяется для идентификации Т-лимфоцитов?
2) ЕА - РОК;
3) ЕАС - РОК;
19. Активацию Т – лимфоцитов вызывает…
1) митоген Лаконоса;
2) липополисахарид;
3) фитогемагглютинин;
5) поливинилпирролидон.
20. Лимфобласт – это…
1) лимфоцит в конечной фазе дифференцировки;
2) лимфоцит с цитотоксическими эффекторными свойствами;
3) предшественник зрелых лимфоцитов;
4) лимфоцит в фазе интенсивного размножения.
21. Показателем активности инфекционного процесса является...
22. АГ – 2-х млрд. взвесь бактерий на физиологическом растворе вызывает следующий феномен серологической реакции:
1) преципитация;
2) агглютинация;
3) опсонизация;
5) флокуляция.
23. Детерминанты иммуноглобулинов, взаимодействующие с антиглобулиновыми антитела, применяемыми в «непрямых» серологических реакциях?
1) идиотипическими;
2) аллотипическими;
3) изотипическими.
24. Иммунным интерфероном является…
1) бетта- интерферон;
2) гамма-интерферон;
3) альфа- интерферон.
25. Часть молекулы антитела, ответственная за активацию комплемента
1) «L» - цепи;
2) Fс– фрагмент;
3) Fав – фрагмент;
4) активные центры;
26. Назовите цитокин Т-хелпера, стимулирующий пролиферацию и дифференцировку других субпопуляций Т-клеток
27. Какие антитела используют для иммуноферментного анализа?
1) антител, реагирующих с ферментами;
2) антител, коньюгированных с ферментами
3) антител, нейтрализующих действие ферментов.
28. Какое время требуется для проявления ГЗТ к аллергену?
1) несколько минут;
4) 12 часов;
5) не ранее 6 часов.
29. Какие лимфоциты играют главную роль при ГЗТ?
1) В1-лимфоциты;
2) В-лимфоциты;
3) Т-хелперы;
4) сенсибилизированные Т - лимфоциты;
5) Т-киллеры.
30. Активацию В – лимфоцитов не вызывают…
1) фитогемагглютинин;
2) коканавалин А;
3) липополисахарид;
4) антигены;
5) цитокины.
31. Классический путь активации комплемента запускается…
1) комплексом АГ – АТ;
2) липополисахаридами микробов;
3) через пропердиновую систему.
32. Назовите функцию, которую не вызывают активированные компоненты комплемента.
1) разрушают клетки;
2) усиливают фагоцитоз;
3) участвуют в анафилактических реакциях;
4) вызывают хемотаксис;
5) стимулируют антителообразование.
33.Какие рецепторы имеются на макрофагах?
3) эритроцитов.
34. Укажите название сыворотки, необходимую для постановки реакции агглютинации с целью серодиагностики
1) диагностикум;
2) испытуемая сыворотка;
3) физиологический раствор;
4) диагностическая сыворотка;
5) комплемент.
35. Назовите способ постановки реакции агглютинации
1) в специальных пробирках диаметром 0,5 см;
2) на стекле;
36. Назовите рецептор – маркер Т лимфоцитов
1) FC - рецепторы для Ig;
2) к эритроцитам мыши;
3) СЗ рецепторы для комплемента;
4) к эритроцитам барана.
37. Назовите рецептор, имеющийся на В-лимфоцитах
1) вируса кори;
2) вируса герпеса;
3) вируса Эпштейн – Барра;
4) эритроцитов барана.
38. Активацию В-лимфоцитов вызывают следующие вещества
1) фитогемагглютинин;
2) коканавалин А.
39. Цитокины – это…
1) белки, образуемые активированными клетками иммунной системы;
2) интерфероны;
3) интерлейкины;
5) лейкины.
40. Назовите антиген, участвующий в реакции РП
1) корпускулярный;
2) растворимый.
41. Назовите основные способы постановки РП
1) реакция на стекле;
2) реакция в геле;
3) развернутая реакция.
42. Назовите условия, определяющие скорость серологических реакций
1) оптимальное соотношение антигена и антитела;
2) рН среды;
3) степень специфичности антигена и антитела;
4) температура;
5) концентрация электролитов.
43. Назовите рецептор – маркер Т- лимфоцитов
1) Fс – рецептор для IgА;
2) для эритроцитов мыши;
3) СЗ – рецептор для комплемента;
4) для эритроцитов барана.
44. Кожно-аллергические пробы применяются для выявления следующих реакций
2) цитотоксической реакции;
3) иммунокомплексной реакции;
4) клеточно-опосредованной реакции.
45. Назовите компонент-антиген РНГА
1) эритроцитарный диагностикум;
2) физиологический раствор;
3) сыворотка больного;
4) сыворотка морской свинки;
5) гемолитическая сыворотка.
46. Назовите аллергены, применяемые для выявления ГЗТ
1) взвесь убитых бактерий;
2) пыльца растений;
3) вирусы.
47. Инфекционная аллергия - это повышенная чувствительность к…
1) аллергенам микроорганизмов;
2) сывороточным аллергенам;
3) пыльцам растений;
4) пищевым аллергенам.
48. Кожно-аллергические пробы, применяемые при туберкулезе
1) р. Манту;
2) р. Бюрне;
3) р. с тулярином;
4) р. с антраксином;
5) р. с кандидозным аллергеном.
49. Диагностическая система РСК включает следующий антиген
1) комплемент;
2) диагностикум;
3) сыворотку крови больного;
4) эритроциты барана;
5) гемолитическую сыворотку.
50. Индикаторная система РСК включает следующий антиген
1) комплемент;
2) диагностикум;
3) сыворотку крови больного;
4) эритроциты барана;
5) гемолитическую сыворотку.
51. С какой целью применяется р. опсонизации?
1) выявления АТ в исследуемой сыворотке;
2) выявления АТ к вирусам;
3) идентификации микробных АГ;
4) установления серовара бактерий.
52. Назовите реагенты, используемые для выявления антител в непрямом методе иммуноферментного анализа
1) меченые антитела против антигена;
2) меченые антитела против иммуноглобулинов;
3) немеченые антитела против иммуноглобулинов;
4) комплемент.
53. Назовите ингредиент, служащей меткой для постановки иммуноферментного анализа
1) индикаторный фермент;
2) антигены;
3) энзиммеченные антитела;
4) немеченые антитела;
5) хромоген.
54. Назовите методы иммунохимического анализа, в которых используется хромогенный субстрат
1) радиоиммунный анализ;
2) иммунофлюоресцентный анализ;
3) иммуноэлектрофорез;
4) иммуноблоттинг.
55. Выберите характеристику метода иммуноблотинга
1) основан на сочетании электрофореза и иммуноферментного анализа.;
2) позволяет выявлять нуклеотидов;
3) позволяет судить о сероконверсии;
4) включает использование меченых антител.
56. С какой целью применяется реакция нейтрализации?
1) опсонинов
2) токсинов
3) неполных антител
4) антигена, полученного путем кипячения.
57. Назовите антигены, участвующие в реакции нейтрализации
2) полисахариды;
3) корпускулярные антигены;
4) экстракты клеток.
58. Реакция преципитации применяются с целью…
1) выявления антител в исследуемой сыворотке;
2) выявления антител к вирусам;
3) идентификации микробных антигенов;
4) установления серовара бактерий;
5) установления серогруппы микроорганизмов.
59. Назовите реакцию используемую для определения неполных антител
1) реакция Оухтерлони;
2) реакция Кумбса;
3) реакция Вассермана
60. Назовите сыворотку, применяемую для нейтрализации биологической активности вируса
1) антитоксическая сыворотка;
2) противовирусная сыворотка;
3) экзотоксин;
61. Назовите индикаторный объект в РН для определения цитопатогенного действия вируса
1) куриные эмбрионы;
2) лабораторные животные;
4) иммунная сыворотка;
5) тканевая культура
62. Реакции нейтрализации основаны на ингибировании антителами…
1) инфекционного свойства вирусов;
2) куриного эмбриона
63. Реакции РН применяются для определения…
1) активности экзотоксинов;
2) активности эндотоксинов
64. Назовите способы постановки РН.
1) в организме лабораторных животных;
2) на стекле капельным способом
65. Индикаторами РН являются…
1) латекс-частицы;
2) эритроциты
66. Определение иммуноглобулинов по Манчини – это…
1) РП в геле;
2) РП в пробирках;
ОТВЕТЫ НА ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ
| 1. | 23. | 45. | |||
| 2. | 24. | 46. | |||
| 3. | 25. | 47. | |||
| 4. | 26. | 48. | |||
| 5. | 27. | 49. | |||
| 6. | 28. | 50. | |||
| 7. | 29. | 51. | |||
| 8. | 30. | 52. | |||
| 9. | 31. | 53. | |||
| 10. | 32. | 54. | |||
| 11. | 33. | 55. | |||
| 12. | 34. | 56. | |||
| 13. | 35. | 57. | |||
| 14. | 36. | 58. | |||
| 15. | 37. | 59. | |||
| 16. | 38. | 60. | |||
| 17. | 39. | 61. | |||
| 18. | 40. | 62. | |||
| 19. | 41. | 63. | |||
| 20. | 42. | 64. | |||
| 21. | 43. | 65. | |||
| 22. | 44. | 66. |
СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ
Задача 1. Из испражнения больного с подозрением на дизентерию выделена чистая культура Sh.flexneri. Какая серологическая реакция позволит определить серотип возбудителя для расшифровки эпидемиологической обстановки? Назовите компоненты реакции.
Задача 2. В клинику поступил больной с предполагаемым диагнозом: «Грипп», «Парагрипп». Для экспресс - диагностики поставлен непрямой способ РИФ. Назовите компонентов реакции.
Задача 3. В инфекционную больницу поступили двое больных с предполагаемым диагнозом «Гепатит А». У первого больного в сыворотке крови обнаружены IgM против вируса гепатита А, а у второго – IgG. С помощью какого метода можно определить Ig? У кого из больных подтвержден диагноз и почему?
Задача 4. Выделена чистая культура вируса полиомиелита. Требуется определение серотипа вируса (1,2,3) в реакции нейтрализации на тканевой культуре. Назовите ингредиентов и механизм реакции.
Задача 5. В вирусологическую лабораторию поступил материал (ликвор) от больного с предположительным диагнозом: «Клещевой энцефалит». После выделения чистой культуры вируса осуществляется идентификация вируса в РН на мышах. Назовите ингредиентов и механизм реакции.
Задача 6. В лабораторию поступила сыворотка крови пациента переболевшего брюшным тифом. С помощью какой серологической реакции можно установить брюшнотифозное бактерионосительство? Назовите ингредиентов.
Задача 7. Выделить чистую культуру М.pneumoniae удается редко и не ранее через месяц. В связи с этим основным методом диагностики пневмоний является серодиагностика, которая осуществляется постановкой РСК. Назовите компонентов реакции.
Задача 8. При исследовании отделяемого зева больного выделена культура С.diphteriae. Какой метод следует применить для определения ее токсигенности? Назовите ингредиентов реакции.
Задача 9. Для уточнения диагноза заболевания больного с подозрением на бруцеллез необходимо использовать опсонофагоцитарную реакцию. Какие ингредиенты следует подготовить для ее постановки? Что такое опсонины, фагоцитарный показатель и опсонический индекс?
Задача 10. Какие ингредиенты необходимо подготовить для постановки непрямого способа ИФА с целью определения Т-хелперов?
Задача 11. У больного с хроническим сепсисом необходима оценка иммунологического статуса. Какие ингредиенты необходимо подготовить для постановки непрямого способа ИФА с целью определения В-лимфоцитов?
Задача 12. У ребенка 3 лет подозревают наличие иммунодефицитного состояния. Какие показатели будут использованы для оценки В-системы иммунитета и какие тесты будут включены в иммунологический анализ?
Задача 13. В лабораторию поступила кровь от больного брюшным тифом для постановки реакции агглютинации. Какие ингредиенты будут использованы для ее постановки? Какой показатель реакции будет использован в качестве диагностического?
Задача 14. Из испражнений больного выделена Е.сoli . Какие методики реакции агглютинации будут использованы для идентификации культуры?
Задача 15. В детском саду планируется ревакцинация детей против туберкулеза. Какую аллергическую пробу и с какой целью предварительно сделать детям? Какой препарат применяется для постановки пробы?
Задача 16. В лабораторию поступил материал (кожа из полушубка) для выявления возбудителя сибирской язвы. Какую серологическую реакцию следует применить для обнаружения антигенов возбудителя в исследуемом материале? Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?
Задача 17. В лабораторию поступила кровь больного с подозрением на грипп. Для подтверждения диагноза необходимо поставить РСК. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку будете оценивать положительный или отрицательный результат реакции?
Задача 18. Выделена культура вируса гриппа А заражением в аллантоисную полость куриного эмбриона. Необходимо поставить РТГА с целью определения серотипа вируса гриппа. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку можно оценить результат реакции?
Задача 19. В лабораторию поступил смыв из носоглотки больного аденовирусной инфекцией. Необходимо поставить реакцию нейтрализации с диагностической целью. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? Оцените результат.
Задача 20. В детском садике планируется осуществить вакцинацию против дифтерии и столбняка АДС вакциной. Какую иммунологическую реакцию используют для определения напряженности поствакцинального иммунитета? Какие ингредиенты следует подготовить? Как оценивается реакция?
Задача 21. В лабораторию института вакцин и сывороток поступила противодифтерийная сыворотка для определения ее специфической активности. Какую реакцию следует использовать для этой цели? Какие ингредиенты следует приготовить для ее постановки?
Задача 22. В лабораторию поступила кровь от больного с подозрением на эпидемический сыпной тиф. При изучении ее в реакции агглютинации получен положительный результат (титр сыворотки 1:800). Антитела при сыпном тифе обнаруживаются с 5-6-го дня болезни, достигая максимума к 14-16-му дню и сохраняются в организме переболевших долгие годы.
Удалось ли поставить этиологический диагноз? Почему? Какие дополнительные исследования можно предложить?
Задача 23. У доярки совхоза при исследовании крови на наличие антител к бруцеллам обнаружен титр 1:200. Как доказать, больна ли доярка в настоящий момент или этот показатель – результат прививки?
Задача 24. В хирургическом отделении у больного развилось осложнение послеоперационной раны. Клинически была заподозрена газовая гангрена. Поставлена РНГА для обнаружения экзотоксина в крови больного. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?
Задача 25. В порт прибыл корабль с грузом из Африки. Карантинная служба порта обнаружила в трюмах трупы крыс. Укажите метод серологического исследования термоэкстракта трупного материала крыс. Предполагаемый диагноз чума.
Задача 26. Мужчина 40 лет обратился к врачу на 8- й день болезни. Несколько дней назад он купался в реке, выше по течению которой было место скота. Среди животных в данной местности регистрировались заболевания лептоспирозом. Врач заподозрил возможность лептоспироза. Для подтверждения диагноза необходимо поставить реакцию агглютинации - лизиса. Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки? По какому признаку будете оценивать положительный или отрицательный результат реакции? Как оценивается реакция? Назовите механизм реакции.
Задача 27. В одном из детских садов зарегистрированы случаи заболевания скарлатиной. Как проверить наличие антитоксического иммунитета к скарлатине у контактных детей? Какие ингредиенты необходимо подготовить для ее постановки?
Задача 28. Первые опыты по противотуберкулезной иммунизации были проведены Р. Кохом. Он многократно вводил туберкулин морской свинке, а затем и инфицировал ее микобактериями туберкулеза. Животное погибало от туберкулеза через 2-4 недели. Почему у животных отсутствовал иммунитет против туберкулеза?
ОТВЕТЫ НА СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ
1. РА на стекле капельным способом.
Компоненты: Выделенная чистая культура Sh.flexneri, диагностические монорецепторные сыворотки против 1 и 2 типов Sh.flexneri, физиологический раствор.
2. Отделяемое носоглотки, диагностические видоспецифические сыворотки (противогриппозная и противопарагриппозная), антиглобулиновая сыворотка, меченная флюорохромом; изотонический раствор хлорида натрия
3. Ig отдельных классов определяют с помощью ИФА. Гепатит А подтверждается у первого больного, так как Ig M является показателем активности инфекционного процесса.
4. Исследуемый вирус, диагностические типоспецифические сыворотки с антителами против трех серотипов вируса полиомиелита, тканевые культуры. Учет реакции проводится по отсутствии ЦПД на тканевой културе из-за нейтрализации патогенного свойства вируса специфическими антителами
5. Исследуемый вирус, диагностическая видоспецифическая сыворотка с антителами против вируса клещевого энцефалита, белые мыши для опыта и контроля (вирус без сыворотки). При положительной реакции мышка выживает из-за нейтрализации инфекционного свойства вируса гомологичными антителами.
6. Реакция пассивной Vi-гемагглютинации. Ингредиенты: сыворотка больного, эритроцитарный Vi-диагностикум (Vi - АГ S.typhi, адсорбированной на поверхности эритроцитов барана), физиологический раствор.
7. Сыворотка крови больного, диагностикум М.pneumoniae, сыворотка морской свинки (комплемент), эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, физиологический раствор.
8. РП в геле по Оухтерлони. Ингредиенты: выделенная чистая культура C.diphtheriae, полоска фильтровальной бумаги, пропитанной противодифтерийной антитоксической сывороткой, чашка Петри с питательной средой.
9. Ингредиенты: исследуемая сыворотка крови, суточная микробная культура, взвесь нейтрофилов (фагоцитов).
Опсонины – антитела (IgG, частично IgA), усиливающие фагоцитоз микробов. Роль опсонинов выполняют также компоненты комплемента, белки острой фазы, сурфактантные белки легких и другие факторы.
Фагоцитарный показатель – количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом, определяют путем подсчета среднего количества фагоцитированных бактерий на один лейкоцит.
Опсонический индекс – фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.
Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.
10. Ингредиенты: плазма крови (взвесь лимфоцитов), моноклониалные антитела против CD3 клеток, антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой; субстрат для пероксидазы (ОФД), фосфатно-солевой буфер.
11. Ингредиенты: плазма крови (взвесь лимфоцитов), моноклониалные антитела против CD19-22 клеток, антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой; субстрат для пероксидазы (ОФД), фосфатно-солевой буфер.
12. Определение количества В-лимфоцитов методом ЕАС – розеткообразования (ЕАС-РОК), ИФА, ПЦ. Определение концентрации иммуноглобулинов в реакции преципитации по Манчини, ИФА. Определение продукции ИЛ-4, 5, 6 с помощью ИФА и проточной цитометрии.
13. Ингредиенты: сыворотка крови больного в разведениях 1:100, 1:200, 1:400, 1:800; диагностикумы (S.typhi, S.P.A., S.P.B), физиологический раствор. Диагностический титр – 1:200, т.е. реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки 1:200 и более. Обычно она наступает в больших разведениях. Если наблюдается групповая агглютинация с двумя или тремя антигенами, то учет реакции проводится по максимальному разведению сыворотки.
14. РА на стекле капельным способом. Положительная реакция подтверждается развернутой РА.
15. Перед вакцинацией ставится проба Манту с целью определения поствакцинального противотуберкулезного нестерильного иммунитета. Ревакцинации подлежат лица с отрицательной пробой Манту. Для постановки пробы применяются очищенный туберкулин (ППД-Л) – очищенный белок туберкулезной палочки.
16. РП по Асколи. Для постановки реакции преципитации необходимо иметь: преципитиноген - гаптен B. antanthracis (экстракт из тканей), преципитин (преципитирующая противосибиреязвенная сыворотка) и физиологический раствор.
17. Ингредиенты: парные сыворотки крови (сыворотки, взятые в начале и конце заболевания), диагностикум вируса гриппа, комплемент (сыворотка морской свинки), гемолитическая сыворотка, 3% взвесь эритроцитов барана, физиологический раствор. При положительной реакции наблюдается гемагглютинация, при отрицательной - гемолиз эритроцитов (лаковая кровь). Диагностическое значение имеет четырехкратное увеличение титра антител во второй сыворотке.
18. Аллантоисная жидкость куриного эмбриона, диагностические противогриппозные типоспецифические сыворотки: А0, А1, А2; 5% взвесь куриных эритроцитов, физиологический раствор.
Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).
19. Смыв из носоглотки, диагностическая видоспецифическая сыворотка с антителами против аденовируса, индикатор реакции (тканевые культуры или эритроциты).При положительной реакции отмечается задержка цитопатогенного действия в культуре тканей или отсутствие гемагглютинации).
20. РПГА. Необходимые ингредиенты: испытуемая сыворотка в различных разведениях (1:10, 1::20, 1:40 и др); эритроцитарные диагностикумы (дифтерийный и столбнячный),физиологический раствор, контрольные сыворотки(противодифтерийная и противостолбнячная) с активностью 10МЕ/мл.
Учет реакции проводят по степени агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде компактной точки или толстого кольца, при положительной - оседают в виде ровного слоя клеток с неровным краем (в виде зонтика).
Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, где еще наблюдается агглютинация.
21. Можно использовать реакцию флоккуляции. Ингредиенты реакции: противодифтерийная сыворотка в различных разведениях, дифтерийный анатоксин с активностью 1Lf, физиологический раствор.
Активность сыворотки выражается в МЕ/мл. (минимальное количество сыворотки, которое даёт интенсивную «инициальную» флоккуляцию с 1Lf анатоксина). Феномен флоккуляции – (помутнение) – внешнее проявление образования комплекса анатоксин + антитоксин в оптимальных количественных соотношениях ингредиентов.
22. Нет, т.к. реакция может быть положительной в 3-х случаях: у больных, переболевших и вакцинированных. Рекомендуется повторная постановка реакции через 10 – 14 дней для определения нарастания титра антител в 4 и более раза, что определяется только у больных.
23. Подтвердить диагноз можно с помощью ИФА определением противобруцеллезных IgM и IgG. IgM является показателем острого бруцеллеза.
24. Двухкратные разведения исследуемой сыворотки, эритроцитарный антительный диагностикум (эритроциты с адсорбированными антитоксинами к экзотоксинам соответствующих видов возбудителей газовой гангрены), физиологический раствор.
25. Реакция термокольцепреципитации по Асколи.
26. Ингредиенты реакции: исследуемая сыворотка крови в различных разведениях, живая лабораторная культура лептоспир, комплемент, физиологический раствор. Учет реакции проводят в препаратах «раздавленной» капли в темном поле или при фазово–контрастной микроскопии. Под воздействием противолептоспирозных бактериолизинов в присутствии комплемента лептоспиры теряют подвижность и распадаются.
27. Проверить наличие иммунитета к скарлатине у контактных детей можно с помощью РПГА.. Ингредиенты реакции: испытуемая сыворотка (разводят физ. раствором от 1:10 до 1:20480 в 12 лунках. полистероловой пластины), диагностикум скарлатинозный эритроцитарный (анатоксин Str.pyogenes , адсорбированный на поверхности эритроцитов), противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью 10 МЕ/мл, физиологический раствор;
Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию эритроцитов.
28. Туберкулин применяется для постановки кожно-аллергической пробы с целью выявления специфической сенсибилизации к инфекционному аллергену, что возникает в результате текущего, перенесенного заболеваний, вакцинации или инфицирования. Для специфической профилактики применяется вакцина BCG.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Основная литература:
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов мед. вузов / под ред. А. А. Воробьева. – 2-е изд., испр. и доп. М. : МИА, 2012. – 702 с.
2. Коротяев А. И., Бабичев. С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология [Электронный ресурс]: учебник для мед. вузов. СПб.: СпецЛит, 2010.
Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html.
3. В. В. Зверев, М. Н. Бойченко. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология [Электронный ресурс]: учебник: в 2 т. Т. 1. М.:Гэотар Медиа, 2010.
Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html.
4. В. В. Зверев, М. Н. Бойченко. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология [Электронный ресурс] : учебник: в 2 т. Т. 2. М.:Гэотар Медиа, 2010.
Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html.
5. Хаитов Р.М. Иммунология: учебник второе издание. - М.: Гэотар Медиа, 2011. – 312с.
6. Хаитов Р.М. Иммунология [Электронный ресурс]: учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009.
Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970412220.html.
Дополнительная литература:
1. Л. В. Ковальчук, Г. А. Игнатьева, Л. В. Ганковская и др. Иммунология. Практикум. Клеточные, молекулярные и генетические методы исследования [Электронный ресурс]: учебное пособие. М.: Гэотар Медиа, 2010.
2. Р. М. Хаитов, А. А. Ярилин, Б. В. Пинегин Иммунология [Электронный ресурс]: атлас. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011.
Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785970418581.html
3. Е.Н. Медуницына, Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин. Методы диагностики в аллергологии и иммунологии [Электронный ресурс]. M.: ГЭОТАР-Медиа, 2011.
Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/970409039V0001.html.
4. Н. Ф. Снегова, Р. Я. Мешкова, М. П. Костинов, О. О. Магаршак. Вакцинопрофилактика в аллергологии и иммунологии [Электронный ресурс]. M.: ГЭОТАР-Медиа, 2011.
Режим доступа: http://www.studmedlib.ru/book/970409039V0005.html.
Давлетшина Гульшат Кинзябулатовна
Габидуллин Зайнулла Гайнулинович
Ахтариева Айгуль Атласовна
Туйгунов Марсель Маратович
Булгаков Айдар Казбекович
Савченко Татьяна Алексеевна
Хуснаризанова Рауза Фазыловна
Габидуллин Юлай Зайнуллович
Алсынбаев Махамат Махаматуллович
Фундамент иммунологии был заложен изобретением микроскопа, благодаря чему удалось обнаружить первую группу микроорганизмов - болезнетворные бактерии.
В конце XVIII века английский сельский врач Эдвард Дженнер сообщил о первой удачной попытке предотвратить заболевание посредством иммунизации. Его подход вырос из наблюдений за одним интересным явлением: доярки часто заражались коровьей оспой и впоследствии не болели натуральной оспой. Дженнер ввел маленькому мальчику гной, взятый из пустулы (нарыва) коровьей оспы и убедился в том, что мальчик оказался иммунным к натуральной оспе.
Работа Дженнера дала начало изучению теории микробного происхождения заболеваний в XIX веке Пастером во Франции и Кохом в Германии. Они отыскали антибактериальные факторы в крови животных, иммунизированных микробными клетками.
Луи Пастер успешно выращивал различные микробы в лабораторных условиях. Как часто бывает в науке, открытие было сделано случайно при культивировании возбудителей холеры кур. Во время работы одна из чашек с микробами была забыта на лабораторном столе. Было лето. Микробы в чашке несколько раз нагревались под солнечными лучами, высохли и потеряли способность вызывать заболевание. Однако куры, получившие эти неполноценные клетки, оказались защищенными против свежей культуры холерных бактерий. Ослабленные бактерии не только не вызывали заболевание, а, напротив, давали иммунитет.
В 1881 году Луи Пастер разработал принципы создания вакцин из ослабленных микроорганизмов с целью предупреждения развития инфекционных заболеваний.
В 1908 г. Илья Ильич Мечников и Пауль Эрлих были удостоены Нобелевской премии за работы по теории иммунитета.
И. Мечников создал клеточную (фагоцитарную) теорию иммунитета, согласно которой решающая роль в антибактериальном иммунитете принадлежит фагоцитозу.
Сначала И. И. Мечников как зоолог экспериментально изучал морских беспозвоночных фауны Черного моря в Одессе и обратил внимание на то, что определенные клетки (целомоциты) этих животных поглощают все инородные частицы (в т. ч. бактерии), проникающие во внутреннюю среду. Затем он увидел аналогию между этим явлением и поглощением белыми клетками крови позвоночных животных микробных телец. И. И. Мечников осознал, что это явление не питание данной единичной клетки, а защитный процесс в интересах целого организма. Ученый назвал действующие таким образом защитные клетки фагоцитами - "пожирающими клетками". И. И. Мечников первым рассматривал воспаление как защитное, а не разрушительное явление.
Против теории И. И. Мечникова в начале XX века выступали большинство патологов, так как они считали лейкоциты (гной) болезнетворными клетками, а фагоциты - разносчиками инфекции по организму. Однако, работы Мечникова поддержал Луи Пастер. Он пригласил И. Мечникова работать в свой институт в Париже.
Пауль Эрлих открыл антитела и создал гуморальную теорию иммунитета , установив, что антитела передаются ребенку с грудным молоком, создавая пассивный иммунитет . Эрлих разработал метод изготовления дифтерийного антитоксина, благодаря чему были спасены миллионы детских жизней.
Теория иммунитета Эрлиха говрит о том, что на поверхности клеток есть специальные рецепторы, распознающие чужеродные вещества (антигенспецифические рецепторы ). Сталкиваясь с чужеродными частицами (антигенами) эти рецепторы отсоединяются от клеток и в качестве свободных молекул выходят в кровь. В своей статье П. Эрлих назвал противомикробные вещества крови термином "антитело ", так как бактерий в то время называли "микроскопические тельца".
П. Эрлиха предполагал, что еще до контакта с конкретным микробом в организме уже есть антитела в виде, который он назвал "боковыми цепями". Теперь известно, что он имел в виду рецепторы лимфоцитов для антигенов.
В 1908 году Паулю Эрлиху вручили Нобелевскую премию за гуморальную теорию иммунитета.
Чуть раньше Карл Ландштейнер впервые доказал наличие иммунологических различий индивидуумов в пределах одного вида.
Питер Медовар доказал удивительную точность распознавания иммунными клетками чужеродных белков: они способны отличить чужеродную клетку всего по одному измененному нуклеотиду.
Френк Бёрнет постулировал положение (аксиома Бёрнета), что центральным биологическим механизмом иммунитета является распознавание своего и чужого.
В 1960 году Нобелевскую премию по физиологии и медицине получили Питер Медавар и Френк Бёрнет за открытие иммунологической толерантности (лат. tolerantia - терпение) - распознавание и специфическая терпимость к некоторым антигенам.
Оценка В-системы иммунитета (гуморальный иммунитет).
Для оценки В-системы иммунитета применяют несколько методов.
Определение В-лимфоцитов в крови . Используют три свойства лимфоцитов этого типа.
Наличие рецепторов к комплементу дает возможность подсчитать так называемые комплементарные розетки, т.е. лимфоциты, образующие розетки с эритроцитами, несущими на своей поверхности комплекс антитело - комплемент (ЕАС-розеткообразование). К розеткообразованию способны не только лимфоциты, но и гранулоциты. И. Вонг, А. Уилсон в 1975 г. описали технику постановки ЕА- и ЕАС-розеткообразования нейтрофилами, что доказало наличие у этих клеток Fс-рецепторов. В 1976 г. И. В. Петрова и соавт. описали способность нейтрофилов к спонтанному розеткообразованию с эритроцитами барана и было показано, что эта субпопуляция нейтрофилов резко возрастает при иммунодепрессивной терапии. По аналогии с лимфо- цитами нейтрофилы делят на спонтанные розеткообразующие клетки, комплементарные розеткообразующие клетки и нулевые. У здоровых людей спонтанных розеткообразующих нейтрофилов имеется от 25 до 35%, а комплементарных - от 14 до 20%.
рис. 1. Розеткообразование В- клеток.
Наличие у В-лимфоцитов рецепторов к Fс-фрагменту иммуноглобулинов приводит к тому, что они адсорбируют на себе агрегированный γ-глобулин. Выявить В-лимфоциты можно с помощью флюоресцентного или радиографического метода, используя меченые агрегаты γ-глобулинов. Человеческие В-лимфоциты образуют розетки с мышиными эритроцитами. Наконец, с помощью иммунофлюоресцентного метода Кунса, применяя антиглобулиновые сыворотки, можно обнаружить и подсчитать все лимфоциты, несущие иммуноглобулиновые детерминанты, т. е. В-лимфоциты. При этом можно провести дифференцированный подсчет клеток, несущих IgМ-, IgG или 1gА-детерминанты. Так же необходимо определять не только процент В-клеток, но и их абсолютное количество в 1 мкл крови.
Определение в крови уровня иммуноглобулинов. Проводят определение суммарной концентрации иммуноглобулинов и количество иммуноглобулинов разных классов. Первое осуществляется методом высаливания сульфа-том цинка с последующей турбидиметрической оценкой, электрофорезом или иммуноэлектрофорезом. Нормальный уровень суммарных иммуноглобулинов у человека составляет от 10 до 20 г/л. Определение количества IgМ, IgG и IgА чаще всего осуществляется методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. IgЕ определяется радиоиммунологическим методом. Верхняя граница нормы составляет 0,0005 г/л.
Определение наличия и уровня изогемагтлютининов в сыворотке крови, а также естественных (нормальных) антител к широко распространенным бактериям и вирусам. В качестве антигенов можно использовать кишечную палочку, стафилококковые токсины, вирус герпеса и др. Следует иметь в виду, что ά- и β-изогемагглютинины относятся к IgМ.
Исследование антителогенеза (первичного и вторичного ответа) после акти-вной иммунизации несколькими убитыми вакцинами. Применяют коклюшную и убитую полиомиелитную вакцины, дифтерийный и столбнячный анатоксины, полисахаридные антигены, выделенные из пневмококков, менингококков и бактерий кишечной группы. Необходимость использования нескольких антигенов связана с генетически детерминированной конкретностью иммунного ответа. Получение низкого иммунного ответа на какой-то один антиген может оказаться результатом того, что данный индивидуум относится к низкоотвечающему на данный антиген генотипу. Реакция на другие антигены может быть нормальной. Вот почему диагноз функциональной неполноценности В-системы можно поставить только при угнетении иммунного ответа на несколько разных антигенов.
Исследование катаболизма иммуноглобулинов в организме. В кровь вводят меченый препарат человеческого иммуноглобулина. Клиренс метки из крови и ее накопление в моче и испражнениях дают возможность определить период полужизни иммуноглобулина. В норме период полужизни IgG равен 24 дням. При экссудативной энтеропатии, нефрозах и некоторых других заболеваниях возникает состояние гиперкатаболизма иммуноглобулинов. Для установления факта избирательного их гиперкатаболизма параллельно определяют период полужизни меченого альбумина.
Биопсия лимфатических узлов , костного мозга, участков слизистой оболочки кишечника. Эту процедуру проводят с целью гистологического обнаружения плазматических клеток, наличия и структуры лимфоидных фолликулов. Кожные реакции, выявляющие гиперчувствительность немедленного типа. К таким пробам относится ШИК-реакция. У людей, иммунизированных против дифтерии, в организме которых содержатся антитела против дифтерийного токсина, внутрикожная инъекция этого токсина не приводит к развитию типичной эритемы.
Стимуляция биосинтеза иммуноглобулинов В-лимфоцитами in vitro. Оценка функциональной активности В-лимфоцитов из крови человека возможна благодаря тому, что некоторые митогены, например митоген лаконоса, обладают способностью вызывать поликлональную стимуляцию В-лимфоцитов. «Валовую» продукцию В-клеток, синтезирующих иммуногло-булины, определяют в культуральной жидкости радиоиммунологическим методом через 7-12 дней культивирования лимфоцитов с митогеном.
рис. 2. Гуморальный иммунный ответ.
В-лимфоциты вырабатывают антитела, помогая распознавать и удалять чужеродные антигены (переносимые бактериями или вирусами). Им помогают циркулирующие в крови Т-лимфоциты и макрофаги.
а) Вирусные частицы через поверхностные клетки проникают в ткань и размножаются.
б) Макрофаги пожирают вирусные частицы,
в) Макрофаги передают антигены циркулирующим в крови Т-лимфоцитам. Это приводит к мобилизации дополнительного количества Т- и В-лимфоцитов.
г) В-лимфоциты распадаются на плазматические В-клетки, которые производят антитела, специфичные для проникшего вируса, и В-клетки памяти.
д) Циркулирующие в крови антитела взаимодействуют с вирусными частицами.
е) Макрофаги распознают и пожирают вирусы, защищая организм от инфекций. 
рис.3. Взаимодействие клеток при иммунном ответе.
Рецептор Т-хелпера распознаёт антигенную детерминанту (эпитоп) вместе с молекулой ГКГ 11 класса, выставленные на поверхности Аг-представляющей клетки. В молекулярном взаимодействии участвует дифференцировочный Аг Т-хелпера СD4. В результате подобного взаимодействия Аг- представляющая клетка секретирует ИЛ-1, стимулирующий в Т-хелпере синтез и секрецию ИЛ-2, а также синтез и встраивание в плазматическую мембрану того же Т-хелпера рецепторов ИЛ-2. ИЛ-2 стимулирует пролиферацию Т-хелперов и активирует цитотоксические Т-лимфоциты. Отбор В-лимфоцитов произво-дится при взаимодействии Аг с Fаb -фрагментами Ig М на поверхности этих клеток. Эпитоп этого Аг в комплексе с молекулой ГКГ II класса узнаёт рецептор Т-хелпера, после чего из Т-лимфоцита секретируются цитокины, стимулирующие пролиферацию В-лимфоцитов и их дифференцировку в плазматические клетки, синтезирующие АТ против данного Аг. Рецептор цитотоксических Т-лимфоцитов связывается с антигенной детерминантой в комплексе с молекулой ГКГ I класса на поверхности вирус- инфицированной или опухолевой клетки. В молекулярном взаимодействии участвует диффе-ренцировочный Аг цитотоксического Т-лимфоцита СD 8. После связывания молекул взаимодействующих клеток цитотоксический Т-лимфоцит убивает клетку-мишень.
Рис. 5. Трехклеточная система взаимодействия при развитии гуморального иммунного ответа.
В-лимфоцит получает специфическую информацию об антигене от поглотившего чужеродный материал макрофага и неспецифическую - от индуктора иммунопоэза (ИИ), секретируемого Т-лимфоцитом после распознавания антигена. В условиях, когда кооперируют все три типа клеток, развивается полноценный иммунный ответ. Если В-клетка получает только информацию об антигене от макрофага, а помощь со стороны Т-клетки отсутствует, то индуцируется специфическая неотвечаемость - толеран-тность. При действии на В-клетку только ИИ происходит синтез неспецифических иммуноглобулинов.
Рис. 6. Взаимодействие между клетками вилочковой железы (источника Т-клеток) и клетками костного мозга (источника В-клеток) при индукции гуморального иммунного ответа.
Гуморальный ответ развивается как комплексный процесс, который включает несколько типов клеток. Введение облученным мышам только клеток костного мозга - ККМ (В-лимфоцитов) или только клеток вилочковой железы - КВЖ (Т-клеток) не обеспечивает развитие иммунного ответа достаточной силы. В то же время введение смеси этих клеток приводит к формированию интенсивной продукции антител к эритроцитам барана. Причем ответ при таком совместном введении клеток значительно выше, чем сумма ответов при раздельном введении клеток различного происхождения. Иначе кооперация различных типов клеток приводит к синергическому эффекту. Ответ оценивали по количеству бляшкообразующих клеток (БОК) в селезенке.
Рис. 7. Развитие гуморального иммунного ответа.
«Суммарная» схема, учитывающая субпопуляции лимфоцитов, которые участвуют в индукции антителогенеза, переключение синтеза IgМ на синтез IgG и создание клеток памяти. Захваченный макрофагами (МФ) антиген (АГ) выводится на клеточную поверхность в иммуногенной форме. В реакцию распознавания АГ вступают «ранние» Т-хелперы с фенотипом, которые способствуют созреванию «поздних» Т-хелперов, помогающих антителопродукции. Развитие первичного IgМ-ответа не требует помощи со стороны Тх Lуt1. Для накопления плазматических клеток, продуцирующих IgМ-антитела (ПК IgМ), очевидно, достаточно простого распознавания АГ на поверхности МФ. Однако помощь Тх Lуt1необходима для внутриклеточного переключения синтеза IgМ на синтез IgG, накопления плазматических клеток, синтезирующих и секретирующих IgG (ПК IgG) и вступления клеток памяти (КП IgG) во вторичный иммунный ответ.
Клеточный иммунный ответ характеризуется пролиферацией коммитированных иммунокомпетентных клеток, реагирующих с Аг в комплексе с молекулой ГКГ I класса на поверхности чужеродных клеток или эндогенными иммуногенами в комплексе с молекулой ГКГ I класса на поверхности собственных вирус- инфицированных и опухолевых клеток. В клеточном иммунном ответе участвует цитотоксический Т-лимфоцит. Цитотоксический Т-лимфоцит (Тс ). Предъявленный на поверхности клетки-мишени Аг в комплексе с молекулой ГКГ I класса связывается с рецептором цитотоксического Т-лимфоцита. В этом процессе участвует молекула СD8 клеточной мембраны Тс. Секретируемый Т-хелперами ИЛ-2 стимулирует пролиферацию цитотоксических Т-лимфоцитов. Уничтожение клетки-мишени. Цитотоксический Т-лимфоцит распознаёт клетку-мишень и прикрепляется к ней. В цитоплазме активированного цитотоксического Т-лимфоцита присутствуют мелкие тёмные органеллы, напоминающие запасающие гранулы секреторных клеток. Гранулы концентрируются в той части Т-киллера, которая расположена ближе к месту контакта с клеткой-мишенью. Параллельно происходят переориентация цитоскелета и смещение в эту область комплекса Гольджи, в котором и формируются гранулы. В них содержится цитолитический белок перфорин.
Выделяемые Т-киллером молекулы перфорина полимеризуются в мембране клетки-мишени в присутствии Са 2+. Сформированные в плазматической мембране клетки-мишени перфориновые поры пропускают воду и соли, но не молекулы белка. Если полимеризация перфорина произойдет во внеклеточном пространстве или в крови, где в избытке имеется кальций, то полимер не сможет проникнуть в мембрану и убить клетку. Специфическое действие Т-киллера проявляется только как результат тесного контакта между ним и клеткой-мишенью, который достигается за счёт взаимодействия Аг на поверхности жертвы с рецепторами Т-киллера. Сам Т-киллер защищен от цитотокси-ческого действия перфорина. Механизм самозащиты неизвестен. Альтернативный механизм уничтожения клетки-мишени, согласно которому цитотоксические Т-лимфоциты и NK-клетки являются источником сигнала, который запускает уже предсуществующую суицидальную программу в клетке-мишени. Действие этого сигнала усиливают глюкокортикоиды.
Количественное содержание иммуноглобулинов (IgА, IgМ, IgG) является основным показателем гуморального иммунного ответа и необходимо для оценки функциональной полноценности иммунной системы и диагностики патологических нарушений ее работы.
Определение уровня иммуноглобулинов является важным при диагностическом и клиническом мониторинге первичных иммунодефицитов, моноклональных гаммапатий, аутоиммунных заболеваний и других патологических состояний (Х-сцепленной агаммаглобулинемии, гипер-IgM, селективном IgА-дефиците, дефиците субклассов IgG, транзиторной гипогаммаглобулинемии новорожденных и др.). При первичных иммунодефицитах определение иммуноглобулинов имеет решающее диагностическое значение.
Снижение концентрации может свидетельствовать о различных патологиях – от генетических дефектов синтеза иммуноглобулинов до транзиторных состояний, связанных с потерей белка организмом. Причинами снижение синтеза иммуноглобулинов могут быть: моноклональные гаммапатии, термические ожоги, злокачественные лимфомы, плазмоцитомы, карциномы, болезни Ходжкина, заболеванияпочек, первичные и вторичные иммунодефициты.
При первичном контакте с антигеном сначала синтезируются IgM, затем IgG. При повторном – IgG синтезируются быстрее и в большем количестве. IgА нейтрализует вирусы и бактериальные токсины. Повышение концентраций говорит о наличии аллергических, аутоиммунных процессов, характерно для инфекционных заболеваний. Увеличение Ig разных классов отмечают при различных патологических ситуациях. Концентрация IgM возрастает в острый период и при обострении хронической инфекции, IgG – в стадии разрешения или формирования хронической инфекции, IgА – при некоторых вирусных инфекциях.
Метод исследования: >
Система комплемента
Система комплемента – комплекс белков, постоянно присутствующих в крови. Это каскадная система протеолитических ферментов, способных лизировать клетки, предназначенная для гуморальной защиты организма от действия чужеродных агентов, участвует в реализации иммунного ответа организма. Является важным компонентом как врожденного, так и приобретенного иммунитета.
Она активизируется реакцией антиген-антитело и необходима для опосредованного антителами иммунного гемолиза и бактериолиза, играет важную роль при фагоцитозе, опсонизации, хемотаксисе и иммунном гемолизе и необходима для усиления эффекта взаимодействия между специфическими антителами и антигеном.
Одной из причин снижения факторов комплемента в сыворотке крови могут являться аутоантитела, направленные против факторов комплемента. Снижение С3 и С4 компонентов комплемента сопровождается клинической картиной рецидивирующего кожного геморрагического васкулита и артралгией.
Уровень компонентов комплемента в крови варьирует в широких пределах. Наследственный дефицит компонентов комплемента или их ингибиторов может приводить к аутоиммунным нарушениям, повторным бактериальным инфекциям, хроническим воспалительным состояниям.
С3-компонент комплемента – центральный компонент системы, белок острой фазы воспаления. Это важнейшая часть защитной системы против инфекций. Он образуется в печени, макрофагах, фибробластах, лимфоидной ткани и коже. Вследствие активации С3 выделяется гистамин из тучных клеток и тромбоцитов, хемотаксис лейкоцитов и соединение антител с антигеном, поддерживается фагоцитоз, усиливается проницаемость стенок сосудов и сокращение гладкой мускулатуры. Активация С3 играет важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний.
С4-компонент комплемента – гликопротеин, синтезируется в легких и в костной ткани. С4 поддерживает фагоцитоз, увеличивает проницаемость стенки сосудов, участвует в нейтрализации вирусов. Он участвует только в классическом пути активации системы комплемента. Увеличение или уменьшение содержания комплемента в организме наблюдается при многих заболеваниях.
Показания к исследованию
- Подозрение на врожденный дефицит комплемента, аутоиммунные заболевания, острые и хронические бактериальные и вирусные инфекции, (особенно рецидивирующие), онкологические заболевания;
- динамическое наблюдение больных с системными аутоиммунными заболеваниями.
Условия взятия и хранения образца: Сыворотка крови. Хранение не более 24 ч при 4–8 °С. Допускается однократное замораживание образца.
Метод исследования: ИФА, иммунотурбидиметрия, иммунонефелометрия.
Снижение концентрации С3 -наблюдается при врожденных дефектах комплемента, различных воспалительных и инфекционных, аутоиммунных заболеваниях, длительном голодании, при лечении цитостатиками, ионизирующем излучении.
Повышение концентрации С4 характерно для реакции острой фазы, отмечается при аутоиммунных заболеваниях, назначении некоторых лекарственных препаратов.
Снижение концентрации С4 – отмечается при врожденных дефектах системы комплемента (С4 дефицит новорожденных), некоторых аутоиммунных заболеваниях, системных васкулитах, синдроме Шегрена, трансплантации почек.
Циркулирующие иммунные комплексы
ЦИК в крови – показатель развития различных воспалительных процессов в организме и активности их течения. Повышение ЦИК наблюдается при острых и хронических инфекциях, аутоиммунных заболеваниях, вирусных гепатитах. ЦИК присутствуют у многих людей, страдающих СКВ и РА, особенно в тех случаях, когда есть осложнения в виде васкулитов. Существует положительная корреляция между активностью заболевания и уровнем ЦИК в крови. Формирование ЦИК представляет собой физиологический механизм защиты, приводящий к быстрому устранению либо эндогенных, либо экзогенных антигенов через ретикуло-эндотелиальную систему. Однако ЦИК обладают способностью связывать и активировать комплемент, что ведет к повреждению ткани. Выходя из кровотока в мелких сосудах, они могут откладываться в тканях, в гломерулах почек, в легких, коже, суставах, стенках сосудов. Клинически это часто проявляется гломерулонефритами, артритами, нейтропениями. Патологические реакции на иммунные комплексы могут быть обусловлены превышением скорости их образования над скоростью элиминации, дефицитом одного или нескольких компонентов комплемента или функциональными дефектами фагоцитарной системы. Высокий уровень ЦИК в сыворотке крови и/или в других биологических жидкостях наблюдается при многих воспалительных и злокачественных заболеваниях, что может стать причиной развития патологии. Определение ЦИК в сыворотке крови – важный маркер для оценки активности заболевания, особенно при аутоиммунных заболеваниях. Снижение концентрации ЦИК в течение заболевания или при лечении свидетельствует об угасании воспалительного процесса и эффективности терапии.
Методы исследования: Для определения ЦИК в сыворотке крови человека используют метод иммунонефелометрии и иммунотурбодиметрии.
Условия взятия и хранения образца: Сыворотка крови. Образец стабилен, не более 24 ч при 4–8 °С. Допускается однократное замораживание образца.
Показания к исследованию: Оценка и мониторинг активности аутоиммунных, аллергических и инфекционных заболеваний.
Повышенные значения